Hologic Progensa PCA3 Assay Instrucțiuni de utilizare

Marca: Hologic

Model: Progensa PCA3 Assay

Tip: Instrucțiuni de utilizare

Progensa PCA3

Progensa PCA3 Assay

Progensa PCA3 Assay 1 501377RO Rev. 003

Pentru utilizarea in diagnosticarea in vit ro.

Numai pentru export S.U.A.

Informatii Generale .......................................................................... 1

Reactivi si Materiale Furniz ate ....................................................... 2

Materiale ......................................................................................... 3

Atentionari si Masuri de Precautie ................................................ 3

Conditii de Pastrare si Manevrare ................................................. 4

Recoltarea, Transportul si Pastrarea Specimenelor ................... 5

Procedura de Testare ...................................................................... 6

Proceduri de Control de Calitate ................................................. 12

Interpretarea Rezultatelor ............................................................. 12

Limitari ....................................................................................... 15

Caracteristici de Performanta ...................................................... 16

Bibliografie ..................................................................................... 20

Informatii Generale

Destinatia Utilizarii

Analiza Progensa PCA3 este un test de amplificare a acidului nucleic

(NAAT) in vitro care detecteaza acidul ribonucleic al Cancerului de

Prostata Gena 3 (PCA3 (ARN) in specimenele de urina barbatesti

pentru a genera un Scor PCA3. Scorul PCA3 are drept scop utilizarea

in corelatie cu algoritmele de diagnostic standardizate in vederea

diagnosticarii cancerului de prostata.

Sumarul si Explicarea Testului

Utilizarea testului antigenului specific prostatei (PSA) din ser pentru

screening-ul cancerului de prostata a avut drept rezultat diagnosticul

biopsiei unor tumori (1) mai mici, nedetectate anterior, creand astlef o

noua dilema in diagnostic: Numai o parte din barbatii cu niveluri

crescute de PSA in ser au cancer de prostata detectabil. Barbatii cu

cel putin o biopsie negativa au adesea un nivel permanent de PSA

crescut in ser, in primul rand din cauza unor prostate marite si a

hiperplaziilor prostatice benigne (BPH). Totusi, un numar semnificativ

de barbati cu PSA usor crescut (2,5-4,0 µg/L) in ser, fie au deja, fie

vor dezvolta cancer de prostata semnificativ din punct de vedere clinic

(1). In timp ce biopsia ramane de referinta in detectarea cancerului de

prostata, sunt necesare totusi teste mai exacte cu o mai mare

specificitate pentru sprijinirea deciziilor de efectuarea a biosiei a

prostatei.

PCA3 (cunoscut de asemenea sub denumirea "PCA3DD3" sau

"DD3PCA3") este un ARN ne-codificat, specific prostatei, care este

supra-reprezentat in celulele cancerului de prostata, cu un nivel

median de 66 de ori mai mare decat cel din tesutul benign adiacent (2).

In contrast, expresia genei PSA este similara in celulele benigne ale

prostatei si in celulele canceroase; nivelurile ARN al PSA pot fi astfel

utilizate pentru a normaliza cantitatea de acid ribonucleic specific

prostatei (ARN) din probele de testare moleculare. A fost demonstrata

posibilitatea de realizare a testarii moleculare cantitative pe baza

PCA3 din sedimentele urinei (2) si din urina integrala (3).

In Analiza Progensa PCA3 se utilizeaza urina integrala reco ltata dupa

efectuarea unui tuseu rectal (DRE) co nstand in trei manopere de

palpare per lob. DRE elibereaza celule ale prostatei prin sistemul de

canale al prostatei in tractul urinar, unde celulele pot fi recoltate din

prima urina. Urina este procesata prin adaugarea Mediului de

Transport al Urinei (UTM), care lezeaza celulele si stabilizeaza ARN.

ARN ai PCA3 si PSA sunt cuantificati, si Scorul PCA3 este determinat

pe baza unui raport dintre ARN PCA3/PSA. In plus fata de

normalizarea semnalului PCA3, masurarea ARN PSA confirma de

asemenea existenta secventei ARN specific prostatei este suficienta

pentru a genera un rezultat valabil. Scorurile PCA3 mai ridicate sunt

corelate cu probabilitatea mai mare a unei biopsii pozitive a prostatei.

Principiile Procedurii

Analiza Progensa PCA3 consta in do ua teste cantitative de amplificare

a acidului nucleic. Progensa PCA3 Assay combina tehnologiile de

captare a tintei, de Amplificare prin Intermediul Transcrierii

(Transcription Mediated Amplification) (TMA), si Analiza pe Protectie a

Hibridizarii (Hybridization Protection Assay) (HPA) pentru a simplifica

operatiunile de procesare a specimenului de urina, de amplificare a

ARN al tintei, si respectiv de detectie a ampliconului.

Cand A naliza Progensa PCA3 este efectuata in laborator, moleculele

ARN al tinteti sunt izolate de specimenele de urina prin captarea tintei.

Oligonucleotidele ("oligonucleotidele de captare"), care sunt

complementare cu regiuni ale tintelor specifice secventei, sunt

hibridizate cu tintele din specimenul de urina. Oligonucleotide de

captare diferite sunt utilizate pentru fiecare tinta. Tinta hibridizata este

apoi capturata pe microparticule magnetice care sunt separate de

specimenul de urina intr-un camp magnetic. Etapele de spalare sunt

folosite pentru a indeparta componentele straine din tubul de reactie.

Etapele de separare magnetica si de spalare sunt efectuate cu un

sistem de captare a tintei.

Amplificarea tintei are loc prin TMA, care este o metoda pe baza de

transcriere de amplificare a acidului nucleic, care utilizeaza doua

enzime, transcriptaza inversa a virusului Moloney murine leukemia

(MMLV) si polimeraza T7 ARN. Un set unic de primeri este utilizat

pentru fiecare tinta. Transcriptaza inversa este utilizata pentru a

genera o copie a acidului deoxiribo nucleic (ADN) (continand o

secventa ce sprijina polimeraza T7 ARN) al secventei tintei.

Polimeraza T7 ARN produce copii multiple ale ampliconului ARN din

sablonul copiei ADN.

Detectia este realizata de HPA utilizand probe de acid nucleic simplu

spiralat cu etichete chemiluminescente care sunt complementare

ampliconului. Probe separate sunt utilizate pentru fiecare amplicon al

tintei. Probele de acid nucleic etichetate hibridizeaza in mod specific cu

ampliconul. Reactivul de Selectie face diferenta intre probele

hibridizate si cele nehibridizate prin inactivarea etichetei de pe probele

nehibridizate. In timpul etapei de detectie, semnalul chemiluminiscent

emis de proba hibridizata este masurat intr-un luminometru si este

raportat ca Unitati de Lumina Relativa (RLU).

ARNs ai PCA3 si PSA sunt cuantificati in tuburi separate si este

determinat Scorul PCA3. Calibratorii ce contin cantitati cunoscute de

transcript ARN PCA3 sau PSA sunt inclusi in fiecare ciclu de rulare al

analizei si utilizati pentru a genera o curba standard. Controalele PCA3

si PSA sunt de asemenea incluse pentru a verifica acuratetea

rezultatelor interpretate fata de curba standard.

Reactivi si Materiale Furnizate

Progensa PCA3

Progensa PCA3 Assay 2 501377RO Rev. 003

Reactivi si Materiale Furnizate

Notă: Pentru informaţii privind orice frază de pericol sau de precauţie

care ar putea fi asociată cu reactivii, consultaţi Safety Data Sheet

Library (Biblioteca pentru fişe cu date de securitate) la adresa

www.hologic.com/sds.

Reactivii si materialele furnizate in Kitul Progensa PCA3/PSA pentru

Analiza Progensa PCA3 sunt prezentate in lista de mai jos. Simbolurile

de Identificare a Reactivilor sunt de asemenea indicate langa numele

reactivului.

Kitul Analizei Progensa PCA3, 2 x 100 Reactii, Nr. de Cat. 302355

(8 cutii)

Kitul de Reactie Progensa PCA3 100

Cutie Refrigerata Progensa PCA3– Dupa receptie, se va pastra la

2°C pana la 8°C pana la data de expirare inscrisa pe eticheta

Simbol

Component

Cantitate

PCA3 Reactiv de Amplificare

Acizi nucleici neinfectiosi uscati in solutie

tamponata HEPES continand <10% agent de

expandare.

1 fiola

PCA3/PSA Reactivul Enzimei

Transcriptaza inversa si polimeraza ARN uscata in

solutie tamponata HEPES continand <10% agent

de expandare.

1 fiola

PCA3 Reactivul Probei

Probe ADN chemiluminescent neinfectios uscate in

succinat solutie tamponata continand <5% agent de

expandare si <5% litiu lauril sulfat.

1 fiola

Cutie la Temperatura Camerei Progensa PCA3 - Dupa receptie, se

va pastra la 15°C pana la 30°C pana la data de expirare inscrisa pe

eticheta

Simbol

Component

Cantitate

Solutie de Reconstituire pentru Amplificarea PCA3

Solutie apoasa continand conservanti (<1%

parabeni).

1 X 9,3

Solutie de Reconstituire a Enzimei PCA3/PSA

Solutie tamponata HEPES continand un surfactant

(10% Triton X-100) si 20% glicerol.

1 X 3,3

Solutie de Reconstituire a Probei PCA3/PSA

Succinat solutie tamponata continand <5% litiu

lauril sulfat.

1 X 12,4

Reactiv de Selectie PCA3/PSA

Solutie tamponata borat continand surfactant (1%

Triton X-100).

1 X 31

TCR

Reactiv de Captare a Tintei PCA3

Acizi nucleici neinfectiosi in solutie tamponata

HEPES continand faza solida.

1 X 22

Cartele de Sigilare

1 pachet

Capace de Reconstituire

1 pachet

Kit de Calibratori si Controale Progensa PC A3 - Dupa receptie, se

va pastra la 2°C pana la 8°C pana la data de expirare inscrisa pe

eticheta

Simbol

Component

Cantitate

CAL

Calibrator 1 PCA3

Solutie tamponata fosfat continand <5% litiu lauril

sulfat.

1 X 2,0

CAL

Calibratori 2-5 PCA3

Acizi nucleici PCA3 neinfectiosi in solutie

tamponata fosfat continand <5% litiu lauril sulfat.

4 X 1,7

Controale Pozitive PCA3

Acizi nucleici PCA3 neinfectiosi in solutie

tamponata fosfat continand <5% litiu lauril sulfat.

2 X 1,7

Fisa de Informare cu privire la Concentratia PCA3

1 fisa

Kit de Reactie Progensa PSA 100

Cutie Refrigerata Progensa PS A - Dupa receptie, se va pastra la

2°C pana la 8°C pana la data de expirare inscrisa pe eticheta

Simbol

Component

Cantitate

Reactiv de Amplificare PSA

Acizi nucleici neinfectiosi uscati in solutie

tamponata HEPES continand <10% agent de

expandare.

1 fiola

Reactivul Enzimei PCA3/PSA

Transcriptaza inversa si Polimeraza ARN uscate in

solutie tamponata HEPES continand <10% agent

de expandare.

1 fiola

Reactivul Probei PSA

Probe ADN neinfectioase chemiluminiscente

uscate in succinat solutie tamponata continand

<5% agent de expandare si <5% litiu lauril sulfat.

1 fiola

Cutie la Temperatura Camerei Progensa PSA - Pastrare la 15°C

pana la 30°C

Simbol

Component

Cantitate

Solutie de Reconstituire pentru Amplificarea PSA

Solutie apoasa continand conservanti (<1%

parabeni).

1 X 9,3

Solutie de Reconstituire a Enzimei PCA3/PSA

Solutie tamponata HEPES continand un surfactant

(10% Triton X-100) si 20% glicerol.

1 X 3,3

Solutie de Reconstituire a Probei PCA3/PSA

Succinat solutie tamponata continand <5% litiu

lauril sulfat.

1 X 12,4

Reactiv de Selectie PCA3/PSA

Solutie tamponata borat continand un surfactant

(1% Triton X-100).

1 X 31

TCR

Reactiv de Captare a Tintei PSA Target

Acizi nucleici neinfectiosi in solutie tamponata

HEPES continand faza solida

1 X 22

Cartele de sigilare

1 pachet

Capace de Reconstituire

1 pachet

Kit de Calibratori si Controale Progensa PS A - Dupa receptie, se

va pastra la 2°C pana la 8°C pana la data de expirare inscrisa pe

eticheta

Simbol

Component

Cantitate

CAL

Calibrator 1 PSA

Solutie tamponata fosfat continand <5% litiu lauril

sulfat.

1 X 2,0

CAL

Calibratori 2-5 PSA

Acizi PSA nucleici neinfectiosi in fosfat solutie

tamponata continand <5% litiu lauril sulfat.

4 X 1,7

Controale Pozitive PSA

Acizi nucleici PSA neinfectiosi in solutie

tamponata fosfat continand <5% litiu lauril sulfat.

2 X 1,7

Fisa de Informare cu privire la Concentratia PSA

1 fisa

Progensa PCA3

Atentionari si Masuri de Precautie

Progensa PCA3 Assay 3 501377RO Rev. 003

Lichide pentru Analiza Aptima - Dupa receptie, se vor pastra la

15°C pana la 30°C (2 cutii) pana la data de expirare inscrisa pe

eticheta

Simbol

Component

Cantitate

Solutie de Spalare

Solutie tamponata HEPES continand <2% sodiu

dodecil sulfat.

1 X 402

Tampon pentru Lichidul de Dezactivare

Solutie tamponata bicarbonat.

1 X 402

Reactiv Ulei

Ulei silicon.

1 X 24,6

Nota. Toate materialele incluse in Kitul Analizei Progensa PCA3 pot fi

achizitionate si separat (pentru detalii, co nsultati sectiunea Materiale).

Materiale

Notă: Pentru informaţii privind orice frază de pericol sau de precauţie

care ar putea fi asociată cu reactivii, consultaţi Safety Data Sheet

Library (Biblioteca pentru fişe cu date de securitate) la adresa

www.hologic.com/sds.

Nota. Materialele disponibile de la Gen-Probe au insc rise numere de

catalog.

Materiale Necesare dar Disponibile Separat

Cat. no.

Kit Progensa PCA3 de Transport al Specimenelor

de Urina 302352

Lumi nometru Leader HC+ 104747

Sistem GEN-PROBE de Captare a Tintei (TCS) 104555

Kit Aptima Auto Detect 301048

2 pipete eppendorf Repeater Plus multicanal 105725

Varfuri pentru pipeta multicanal (2,5 mL, 5,0 mL, 25,0 mL)

Fie:

2 agitatoare vortex multi-tub 102160F

3 Bai de apa circulanta (62°C ± 1°C,

42°C ± 1°C, 62°C ± 1°C) 104586F

3 Distantiere pentru baia de apa 104627

Fie:

2 SB100 Bai cu Incalzire Uscata /Vortexers 105524F

Instrumente SB100 suplimentare pot fi necesare

in functie de materialele utilizate)

Micropipeta, 1000 µL RAININ PR1000 901715

Varfuri, 1000 µL P1000 105049

Pipetor, eppendorf 20 pana la 200 µL 105726

Varfuri, Pipete 20 pana la 200 µL

Solutie cu clor de la 5% pana la 7% (0,7 M pana

la 1,0 M) solutie hipoclorit de sodiu

Recipient din plastic cu capac de diametru mare

Recipiente standard de recoltare a urinei , fara conservanti

Unitati de cate Zece Tuburi (TTU) TU0022

Casete cu cate Zece Varfuri (TTC) 104578

Standard de calibrare SysCheck 301078

Materiale Optionale

Kit de Reactie Progensa PCA3 100 302354

Kit de Reactie Progensa PSA 100 302357

Kit de Calibratori si Controale Progensa PCA3 302353

Kit de Calibratori si Controale Progensa PSA 302356

Paneluri Progensa PCA3/PSA pentru instruire 302350

Kit Progensa PCA3 pentru Diluarea Specimenelor 302351

Kit de Lichide pentru Analiza Aptima 302002C

Varfuri de unica folosinta cu filtru pentru pipete (1 mL) 10612513

(Tecan)

TECAN Freedom EVO 100/4 900932

Placa Suport pentru PCA3, DTS 800 902021

Rezervor pentru reactivi (un sfert de modul de 40 mL) 104765

Split reagent reservoir (sfert de modul 19 mL x 2) 901172

T uburi de transport 302521

Capace Inlocuitoare penetrabile 302520

Capace Inlocuitoare nepenetrabile 103036A

Atentionari si Masuri de Precautie

A. Pentru utilizare in diagnosticarea in vitro.

B. Numai pentru export S.U.A.

Atentionari pentru Laborator

C. Utilizati numai articolele de laborator de unica folosinta furnizate

sau mentio na te.

D. Respectati masurile de precautie de laborator obisnuite. Nu

mancati, nu beti si nu f umati in zonele destinate lucrului. Purtati

manusi de unica folosinta fara pudra, ochelari de protectie, si

halate de laborator atunci cand manipulati specimenele de urina

si reactivii din kit. Spalati-va temeinic pe maini dupa manipularea

specimenelor de urina si a reactivilor din kit.

E. Atentionare: Substa Iritante si Corozive: Evitati contactul

lichidelor Auto Detect 1 si Auto Detect 2 cu pielea, ochii si

membranele mucoase. In cazul in care aceste lichide intra in

contact cu pielea sau ochii, spalati cu apa zona afectata. In cazul

in care aceste lichide se varsa, diluati substanta varsata cu apa

inainte de a o sterge.

F. Suprafetele de lucru, pipetele, si alte echipamente trebuie

decontaminate in mod regulat cu hipoclorit de sodiu solutie de

2,5% pana la 3,5% (0,35M pana la 0,5M) (a se vedea sectiunea

Note Procedurale).

G. Se recomanda existenta unei zone separate pentru post-

amplificare pentru a minimiza riscul de contaminare cu amplicon

in timpul analizei. Aceasta zona trebuie sa fie la distanta de zona

de pre-amplificare, unde se desfasoara pregatirea reactivilor,

captarea tintei, si amplificare.

H. Pentru a ajuta in prevenirea contaminarii cu amplico n a zo nelor

din laborator, spatiul laboratorului trebuie amenajat astfel incat sa

existe un flux de lucru unidirectional de la prepararea reactivului

pana la post-amplificare. Specimenele, echipamentele, si reactivii

Conditii de Pastrare si Manevrare

Progensa PCA3

Progensa PCA3 Assay 4 501377RO Rev. 003

nu treb uie readusi i n zo na in care s-a efectuat o etapa anterioara.

Personalul din laborator nu trebuie sa treaca inapoi in zonele de

lucru anterioare fara a respecta masuri adecvate de precautie

impotriva contaminarii.

Atentionari cu privire la Specimene

I. Dupa adaugarea urinei, nivelul de lichid din tubul de transport al

specimenelor de urina trebuie sa se inscrie intre cele doua linii

negre indicatoare de pe eticheta tubului. In caz contrar,

specimenul trebuie refuzat.

J. Respectati conditiile corespunzatoare de pastrare in timpul

transport ului specimenelor pentru a asigura integritatea acestora.

Nu a fost evaluata stabilitatea specimenelor in cazul transportului

in conditii diferite de cele recomandate.

K. Datele de expirare inscrise pe kiturile de recoltare se refera la

locul reco ltarii si nu la unitatea de testare. Specimenele recoltate

in orice moment inaintea datei de expirare a kitului de recoltare,

care sunt transportate si pastrate in conformitate cu specificatiile

din insertul tehnic, sunt valabile pentru testare chiar daca data de

expirare a tubului de reco ltare a trecut.

L. Pastrati toate specimenele la temperaturile specificate.

Performanta analizei poate fi influentata de utilizarea

specimenelor pastrate in mod necorespunzator. Pentru

instructiuni specifice, consultati Reco ltarea, Transportul si

Pastrarea Specimenelor.

M. Specimenele de urina pot fi infectioase. Respectati Masurile de

Precautie Universale atunci cand efectuati aceasta analiza.

Metodele adecvate de manipulare si indepartare a produselor

trebuie stabilite de catre directorul laboratorului. Numai personalul

calificat in utilizarea Analizei Progensa PCA3 si instruit in mod

adecvat cu privire la manipularea materialelor infectioase ar trebui

sa efectueze aceasta procedura.

N. Evitati contaminarea incrucisata in timpul etapelor de manipulare

a specimenului. Specimenele de urina pot co nti ne nive luri

crescute de ARN al tintei. Asigurati-va de faptul ca recipientele cu

specimene nu intra in contact unele cu altele, si indepartati

materialele folosite fara a le trece peste recipeintii neacoperiti.

Schi mbati-va manusile daca acestea intra in contact cu

specimenele, pentru a evita contaminarea incrucisata.

Atentionari cu privire la Analiza

O. Nu utilizati kitul dupa data de expirare a acestuia.

P. Pentru Kit-ul de testare Progensa PCA3, nu schimbaţi între ei,

nu amestecaţi şi nu combinaţi reactivii de test PCA3 din

loturi cu numere diferite (adică, pentru fiecare analit, reactivii de

test din cutia „refrigerată” şi din cea „la temperatura camerei”

trebuie să provină din acelaşi lot). Reactivii de test pot fi utilizaţi

împreună cu calibratori şi kit‑uri de control din diferite loturi . Kit-

urile Aptima Assay Fluids sunt interşanjabile. Kit-urile de reactivi

PCA3 şi PSA nu trebuie să fie din acelaşi lot.

Q. Pastrati toti reactivii analizei la temperaturile specificate.

Performanta analizei poate fi influentata de utilizarea reactivilor

analizei pastrati in mod necorespunzator. Pentru instructiuni

specifice, consultati sectiunile Conditii de Pastrare si Manipulare

si Note Procedurale.

R. Pentru dezactivarea analizei (a se vedea Procedura de Testare),

concentratia minima de solutie de hipoclorit de sodiu trebuie sa fie

de 2,5% (0,35 M) dupa diluarea 1:1 cu tampon de dezactivare.

Astfel, solutia de hipoclorit de sodiu initiala trebuie sa fie de 5%

pana la 7% (0,7 M pana la 1,0 M) pentru a atinge co ncentratia

finala necesara dezactivarii.

S. Trebuie sa utilizati varfuri cu filtru hidrofob. Un numar de minim

doua pipete multicanal trebuie alocate in utilizarea acestei

analize: una pentru utilizarea in etapele de pre-amplificare si una

pentru utilizarea in cadrul etapelor post-amplificare. O micropipeta

trebuie alocata utilizarii in transferul specimenului, cu exceptia

cazului in care se foloseste un instrument TECAN Freedom EVO

100/4. Toate dispozitivele de pipetare trebuie curatate cu

regularitate co nform celor descrise in sectiunea Note Procedurale.

T. Cand folositi pipete multicanal pentru adaugarea reactivului, nu

atingeti tubul de reactie cu varful pipetei pentru a preveni

contaminarea de la un tub la altul.

U. Omogenizarea corespunzatoare este necesara pentru a obtine

rezultatele exacte ale testului. Pentru detalii complete, consultati

sectiunea Note Procedurale.

V. Bai de apa separate trebuie alocate pentru etapele de pre-

amplificare, amplificare, si post-amplificare ale analizei.

W. Unii reactivi ai acestui kit au inscrise pe etichete simbolurile de

riss si siguranta conform Directivei Europene 1999/45/EC si

trebuie manipulati in consecinta. Fisele Datelor de Securitate ale

Materialelor pot fi vizualizate pe www.gen-probe.com si sunt

disponibile la cerere.

Conditii de Pastrare si Manevrare

A. Pentru informatii cu privire la pastrarea reactivilor, consultati

sectiunea Pastrarea Reactivilor.

Tabelul 1: Pastrarea Reactivilor

Reactiv/Lich

id Pastrarea in cazul

nedesigilarii

Stabilitatea (pana la data

de expirare) in cazul

Desigilarii/Reconstituirii

Reactivii de

Amplificare

2°C pana la 8°C pana la

data de expirare

30 de zile la 2°C pana la

8°C*

Reactivii Probei

2°C pana la 8°C pana la

data de expirare

30 de zile la 2°C pana la

8°C*

Reactivul Enzimei

2°C pana la 8°C pana la

data de expirare

30 de zile la 2°C pana la

8°C*

Reactivii de

Captare a Tintei

15°C pana la 30°C pana

la data de expirare

30 de zile la 15°C pana la

30°C

Solutia de

econstituire

pentru Amplificare

2°C pana la 30°C pana

la data de expirare N/A (unica folosinta)

Solutia de

Reconstituire a

Probei

2°C pana la 30°C pana

la data de expirare N/A (unica folosinta)

Solutia de

Reconstituire a

Enz imei

2°C pana la 30°C pana

la data de expirare N/A (unica folosinta)

Reactivul de

Selectie

2°C pana la 30°C pana

la data de expirare

30 de zile la 15°C pana la

30°C

Calibratorii

2°C pana la 8°C pana la

data de expirare

N/A (un singur ciclu de

rulare)

Controalele

2°C pana la 8°C pana la

data de expirare

N/A (un singur ciclu de

rulare)

Reactivul Ulei

15°C pana la 30°C pana

la data de expirare

30 de zile la 15°C pana la

30°C

Solutia de Spalare

15°C pana la 30°C pana

la data de expirare

30 de zile la 15°C pana la

30°C

Tamponul pentru

Lichidul de

Dezactivare

15°C pana la 30°C pana

la data de expirare

28 de zile la 15°C pana la

30°C

* Pot fi reutilizate pana la 4 ori pentru alte cicluri de rulare, cu conditia

ca timpul total de ramanere la temperatura camerei sa nu fie mai mare

de 24 ore.

Progensa PCA3

Recoltarea, Transportul si Pastrarea Specimenelor

Progensa PCA3 Assay 5 501377RO Rev. 003

B. Nu pastrati Reactivul de Captare a Tintei la temperaturi sub

15°C.

C. Reactivul Probei si Reactivul Probei Reconstituite sunt

fotosensibile. Protejati reactivii de expunerea prelungita la lumina

in timpul pastrarii si pregatirii in vederea utilizarii.

D. Nu congelati reactivii.

E. Nu utilizati reactivii sau lichidele dupa data de expirare.

F. Calibratorii si Controalele Progensa PCA3 si PSA sunt fiole cu

utilizare in cadrul unui singur ciclu de rulare si trebuie aruncati

dupa folosire.

G. Modificarile in aspectul fizic al reactivului furnizat poate indica

instabilitatea sau deteriorarea acestor materiale. Daca

schimbarile aspectului fizic al reactivilor sunt observate dupa

resuspendare (de exemplu, modificarea evidenta a culorii

reactivului sau aspectul tulbure indica o contaminare microbiana),

contactati Departamentul de Suport Tehnic al Gen-Probe inainte

de utilizare.

H. Aruncati reactivul reconstituit dupa 30 de zile sau la data de

expirare, oricare dintre aceste cazuri intervine primul.

I. Resturile de reactivi desigilati sau reconstituiti pot fi utilizati in

analizele ulterioare daca au fost pastrate corespunzator dupa

utilizarea initiala. Reactivul ramas poate face parte dintr-o proba

de tip pool in combinatie cu alt reactiv proaspat sau cu alt rest de

reactiv apartinand aceluiasi lot. Nu schimbati intre ei, nu

amestecati si nu combinati reactivi din kituri avad numere de

lor diferite (vezi atentionari si masuri de precautie). Nici o

componenta a reactivului de tip pool nu trebuie sa depaseasca

limitele de pastrare a reactivilor desigilati sau reconstituiti.

Asigurati-va de faptul ca reactivul de tip pool a fost omogenizat in

totalitate si ca a fost pregatit un volum suficient pentru a furniza

destul reactiv pentru un ciclu de complet de rulare.

Recoltarea, Transportul si Pastrarea

Specimenelor

Analiza Progensa PCA3 este conceputa pentru a cuantifica ARN

PCA3 si PSA din prima urina recoltata dupa efectuarea tuseului reactal

(DRE) constand in trei manopere de palpare per lob. Urina este

procesata utilizand Kitul Progensa PCA3 de Transport al Specimenelor

de Urina. Stabilitatea ARN PCA3 si PSA in urina si in urina procesata a

fost stabilita prin mo nitorizarea nivelurilor de copiere a ARN in

specimenele de urina recoltate conform instructiunilor de mai jos.

A. Instructiuni pentru recoltarea si procesarea probei de urina:

1. Poate fi de ajutor sa ii solicitati pacientului sa consume un

volum mare de apa (aproximativ 500 mL) pentru a asigura o

cantitate suficienta de urina pentru recoltare.

2. Inaintea recoltarii specimenului de urina, efectuati un tuseu

rectal conform celor descrise mai jos:

Aplicati presiune asupra prostatei, astfel incat sa reduceti

suprafata cu aproximativ 1 cm, de la baza catre apex si din

lateral catre linia mediana pentru fiecare lob conform celor

indicate in figura de mai jos. Efectuati exact trei manopere

de palpare pentru fiecare lob. Aceasta procedura nu are

drept scop masajul prostatei.

Figura 1. Directia Corespunzatoare de Aplicare a Presiunii asupra

Prostatei

3. Dupa tuseul rectal, solicitati pacientului sa furnizeze o

cantitate de specimen din prima urina (aproximativ 20 pana

la 30 mL din primul jet de urina) intr-un recipient de recoltare

al urinei etichetat corespunzator. Aceasta trebuie sa fie

prima proba de urina dupa tuseul rectal. Utilizati un recipient

de recoltare fara conservanti. In cazul in care pacientul nu

poate opri jetul de urina si furnizeaza o cantitate mai mare

decat cea solicitata de 20 pana la 30 mL, pastrati intregul

volum. Daca pacientul nu poate furniza cantitatea solicitata,

cantitatea minima necesara pentru a rula Analiza Progensa

PCA3 este de cel putin 2,5 mL. In caz contrar, specimenul

trebuie respins.

Nota. Volumele foarte mari de urina pot scadea concentratiile

analitului PCA3 si PSA, si cateodata pot avea drept urmare un

specimen invalid. Astfel, pacientul trebuie sa incerce sa evite

umplerea recipientului de recoltare a urinei.

4. Specimenele de urina neprocesate, in cazul in care

acestea nu sunt procesate imediat, trebuie pastrate la

2°C pana la 8°C sau pastrate la gheata. Specimenele de

urina neprocesate, pastrate la rece, trebuie sa fie

transferate intr-un tub de transport al specimenului de

urina in decurs de 4 ore de la recoltare. In caz contrar,

specimenul trebuie respins si trebuie recoltat un nou

specimen. Nu congelati specimenele de urina

neprocesate.

5. Pentru a procesa specimenele de urina, pozitionati ermetic

capacul si intoarceti specimenul de urina cu susul in jos de 5

ori pentru a resuspenda celulele. Inlaturati capacul tubului de

transport al specimenelor de urina si transferati o cantitate

de 2,5 mL din urina reco ltata in tub utilizand pipeta de

transfer de unica folosinta furnizata. A fost adaugata o

cantitate corecta de urina atunci cand nivelul lichidului se

situeaza intre liniile negre de marcaj de pe eticheta tubului

transport al specimenelor de urina.

6. Repuneti etans capacul tubului de transport al specimenelor

de urina si intoarceti tubul cu susul in jos de 5 ori pentru

omogenizare. Acest specimen reprezinta acum specimenul

de urina procesat.

B. Transportul si pastrarea specimenelor inainte de testare:

1. Specimenele de urina procesate trebuie transportate catre

laborator in tubul de transport al specimenelor de urina.

Acestea trebuie expediate in conditii normale (fara control de

temperatura) sau congelate. Programati transportul astfel

incat sa va asigurati de faptul ca specimenele de urina

procesate sunt receptionate de catre locatia de testare in

decurs de 5 zile de la recoltare. Dupa receptionarea

transport ului, laboratorul trebuie sa verifice data recoltarii

specimenului de pe tub. Daca specimenele au fost expediate

in conditii normale si sunt receptionate la mai mult de 5 zile

Procedura de Testare

Progensa PCA3

Progensa PCA3 Assay 6 501377RO Rev. 003

dupa recoltarea specimenului, specimenul trebuie respins si

trebuie emisa o cerere pentru un nou specimen. Laboratorul

poate pastra specimenele la 2°C pana la 8°C timp de pana

la 14 zile, dupa care specimenele trebuie aruncate. Daca

este necesara pastrarea pentru perioade mai indelungate,

consultati Tabelul 2 pentru a identifica perioadele de

pastrare permise la diferite temperaturi.

Tabelul 2: Durata de Pastrare a Specimenelor de Urina Procesate

Temperatura de Pastrare

Perioada

Transportul si pastrarea specimenelor procesate

Pana la 5 zile*

Dupa receptionarea de catre locatia de testare

2°C pana la 8°C

Pana la 14 zile

-35°C pana la -15°C

Pana la 11 luni**

-65°C sau la temperaturi mai scazute

Pana la 36 luni**

*Perioada de transport permisa i n co nditii normale sau congelate.

**Perioada permisa dupa pastrarea in frigider

2. Specimenele de urina procesate pot fi supuse la maxim cinci

cicluri de congelare-dezghetare.

C. Pastrarea specimenului dupa testare:

1. Specimenele care au fost testate trebuie pastrate in pozitie

vericala intr-un suport.

2. Daca nu au fost reacoperite cu capace intacte, tuburile de

transport al specimenelor de urina trebuie acoperite cu un

plastic nou curat sau cu o folie protectoare.

3. Daca specimenele testate trebuie congelate sau trasnportate,

indepartati capacele penetrabile si puneti alte capace noi,

nepenetrabile, pe tuburile de transport al specimenelor de

urina. Daca specimenele trebuie transportate catre alta

unitate in vederea testarii, temperaturile recomandate

trebuie respectate. Evitati improscarea si contaminarea

incrucisata.

Nota. Specimenele trebuie expediate in conformitate cu

reglementarile natio nale si internationale de transport

aplicabile.

Procedura de Testare

A. Pregatirea Zonei de Lucru

1. Reglati una dintre baile de apa la 62°C ± 1°C pentru pre-

amplificare, si a doua baie de apa la 42°C ± 1°C pentru

amplificare, si o a treia baie de apa to 62°C ± 1°C for post-

amplificare. Asigurati-va de faptul ca baile de apa contin

suficienta apa (a se vedea sectiunea Note Procedurale).

Daca utilizati Baia de Incalzire Uscata / Vortexer SB100,

consultati Fisa de Utilizare a Baii de Incalzire Uscata /

Vortexer SB100 pentru Analiza Progensa PCA3 Assay (fisa

de utilizare a SB100).

2. Inainte de a incepe testarea, stergeti suprafetele de lucru si

pipetele cu solutie de hipoclorit de sodiu de 2,5% pana la

3,5% (0,35M pana la 0,5M). Lasati solutia de hipoclorit de

sodiu sa intre in contact cu suprafetele si pipetoarele timp de

cel putin 1 minut, iar apoi clatiti cu apa. Nu lasati solutia de

hipoclorit de sodiu sa se usuce. Acoperiti suprafata mesei de

lucru pe care veti efectua analiza cu o husa de laborator

absorbanta curata dublata pe partea opusa cu plastic.

B. Place Asezati un numar suficient de Casete a cate Zece Varfuri in

Sistemul de Captare a Tintei (TCS). Asigurati-va de faptul ca

flaconul de spalare al TCS este umplut cu Solutie de Spalare si

ca aspiratorul este conectat la pompa vacuum. (Consultati

Manualul Operatorului Sistemului de Captare a Tintei).

C. Reconstituirea si Prepararea Reactivului

Reconstituirea reactivului trebuie efectuata inainte de a incepe

procedura de transfer al specimenului.

1. Pentru a reconstitui Reactivul de Amplificare, al Enzimei, si

al Probei, combinati flacoanele de reactiv liofilizat cu solutia

de reconstituire. In cazul in care a fost tinuta la rece, lasati

Solutia de Reconstituire sa ajunga la la temperatura camerei

inainte de utilizare.

Figura 2. Procesul de Reconstituire

a. Imperecheati solutia de reconstituire corespunzatoare

cu reactivul uscat. Verificati ca fiolele sa aiba etichete

de aceeasi culoare pentru a va asigura de

imperecherea corecta.

b. Deschideti flaconul cu reactivul uscat si introduceti cu

fermitate capatul crestat al capacului de reconstituire in

deschiderea fiolei (Figura 2, Pasul 1).

c. Deschideti solutia de reconstituire cu eticheta de

aceeasi culoare, si asezati capacul pe o suprafata de

lucru curata si acoperita. in timp ce mentineti sticluta cu

solutie pe masa de lucru, introduceti cu fermitate in

deschizatura sticlutei celalalt capat al capacului de

reco nstit uire (Figura 2, Pasul 2).

d. Inoarceti usor ansamblul de sticlute. Permiteti solutiei

sa se scurga din sticluta in fiola de sticla (Figura 2,

Pasul 3). Asteptati ca reactivul liofilizat sa se

reconstituie solutie, apoi rotiti usor solutia din fiola de

sticla pentru omogenizare. Evitati formarea spumei in

timpul amestecarii (Figura 2, Pasul 4).

e. Intoarceti ansamblul si inclinati-il intr-un unghi de 45°

pentru a minimiza crearea spumei (Figura 2, Pasul 5).

Permiteti intregului lichid sa se scurga inapoi in flaconul

de plastic.

f. Indepartati capacul de reco nstituire si fiola de sticla

(Figura 2, Pasul 6).

g. Repuneti capacul flaconului de plastic (Figura 2, Pasul

7). Inregistrati initialele operatorului si data reco nstituirii,

pe toate fiolele de reactivi reconstituiti. Asigurati-va ca

ati notat analitul (PCA3 sau PSA) pe fiolele

Reactivulului Probei.

h. Aruncati capacul de reconstituire si fiola de sticla

(Figura 2, Pasul 8).

Progensa PCA3

Procedura de Testare

Progensa PCA3 Assay 7 501377RO Rev. 003

2. Reactivii Probei, de Amplificare si al Enzimei reconstituiti

anterior trebuie sa ajunga la temperatura camerei (15°C

pana la 30°C) inainte de a incepe testarea. Co nsultati

sectiunea Conditii de Pastrare si Manipulare in cazul in care

doriti sa obtineti reactivi de tip pool din resturi de reactivi.

Daca Reactivul de Amplificare reconstituit contine precipitat

care nu reconstituie solutie la temperatura camerei, incalziti

la 62°C ± 1°C timp de 1 pana la 2 minute in zona de pre-

amplificare. Daca Reactivul Probei reconstituit contine

precipitat care nu reconstituie solutie la temperatura

camerei, incalziti la 62°C ± 1°C timp de 1 pana la 2 minute in

zona de post-amplificare. Dupa aceste etape de incalzire,

reactivii reconstituiti pot fi utilizati chiar daca precipitatul

rezidual persista. Dupa resuspendare, omogenizati

continutul fiolelor prin intoarcerea usoara a acestora.

D. Organizarea Suportului

Pipeta multicanal utilizata in operatiunile de captare a tintei, de

transfer al specimenului si de amplificare a acestuia trebuie

alocata numai in scopul efectuarii acestor etape (a se vedea

Atentionari si Masuri de Precautie

1. Organizati un suport pentru analitul PCA3 si alt suport pentru

analitul PSA.

Nota. Daca numarul specimenelor este destul de redus,

ambii analiti pot fi testati intr-un singur suport. Daca utilizati

instrumentul TECAN Freedom EVO 100/4, trebuie pastrate

suporturi separate pentru fiecare dintre analiti. Nu pot fi

testate mai mut de doua suporturi (20 TTU-uri) pline in

acelasi timp.

2. In suportul(rile) de Unitati de Zece Tuburi (TTU), puneti

destule TTU-uri pentru a aseza calibratorii, controalele, si

specimenele pentru fiecare analit.

3. Aplicati pe TTU-uri etichete cu datele de identificare ale

probelor/specimenelor. Tabelul 3 descrie adaugarea

calibratorilor, controalelor, si a specimenelor. Incepeti

calibratorii PSA pe un TTU nou.

Nota. Calibratorii vor fi rulati in trei replicate, iar controalelel

in doua replicate fiecare, si trebuie rulate pe acelasi suport

cu specimenele. Specimenele trebuie rulate in duplicat. Nu

lasati tuburi de reactie goale intre calibratori, controale, si

specimene. Daca utilizati instrumentul TECAN Freedom

EVO 100/4, co nsultati Fisa de Utilizare a inst rument ului

TECAN Freedom EVO 100/4 pentru Analiza Progensa PCA3

(fisa de utilizare a TECAN Freedom EVO) pentru mai multe

ins tructiuni.

Tabelul 3: Examplu de Organizare a Suportului

zitia

Suportului

Descrierea

Probei

*Concentratia

PCA3 a T intei

(c/mL)

* Concentratia

PSA a Tintei

(c/mL)

1 pana la 3

Calibrator 1

4 pana la 6

Calibrator 2

250

7.500

7 pana la 9

Calibrator 3

2.500

75.000

10 pana la 12

Calibrator 4

25.000

750.000

13 pana la 15

Calibrator 5

125.000

3.000.000

16 pana la 17

Contro l A

1.250

37.500

18 pana la 19

Contro l B

62.500

1.500.000

20 pana la n

Specimen

necunoscut

*Calibratorii si Controalele Pozitive PCA3 si PSA au valori atribuite,

astfel incat valorile c/mL reale pentru Calibratorii 2 pana la 5 si

Controalele A si B vor fi usor diferite fata de concentratiile tintei

inregistrate in tabel, si vor varia de la un lot la altul. Informatia cu

privire la concentratii este f urniz ata pe un card din pachetul de fiole ale

calibratorilor si ale controalelor si este utilizata pentru calibrarea si

determinarea valabilitatii ciclului de rulare.

E. Verificarea Informatiilor cu privire la Concentratii

Verificati impreuna cu administratorul de sistem al Programului

Analizei Progensa PCA3 pentru a va asigura ca informatiile

despre co ncentratia pentru loturile Kiturilor de Calibratori si

Controale Progensa ale PCA3 si PSA testate au fost introduse.

Pentru mai multe informatii, consultati Quick Reference Guide

pentru Analiza Progensa PCA3 (Ghid Rapid de Referinta) sau

Manualul Administratorului de Sistem al Programului Analizei

Progensa PCA3.

Nota. Introducerea informatiilor cu privire la concentratie este

necesara inainte de prima utilizare a fiecarui lot nou de kituri de

calibratori si controale. Rularile ulterioare utilizand calibratorii si

controalele din acelasi lot de kituri nu necesita alte operatiuni.

F. Organizarea Editorului Listei de Lucru

Generati o lista de lucru pentru rularea analizei utlizand Editorul

GEN-PROBE al Listei de Lucru pe un computer aflat in zona de

pre-amplificare. Pentru a utiliza Editorul Listei de Lucru, consultati

Ghidul Rapid de Referinta sa u Manualul de Operare pentru

Editorul Listei de Lucru GEN-PROBE. Daca utilizati instrumentul

TECAN Freedom EVO 100/4, consultati de asemenea fisa de

utilizare TECAN Freedom EVO pentru mai multe instructiuni.

G. Pregatirea probei

1. Lasati calibratorii si controalele sa ajunga la temperatura

camerei inainte de testare. Omogenizati continutul fiolelor

prin usoara intoarcere a acestora.

2. Lasati specimenele sa ajunga la temperatura camerei inainte

de testare. Nu agitati specimenele cu ajutorul vortexului.

Specimenele trebuie omogenizate prin intorcere usoara,

ocazionala, in timpul perioadei de incalzire. Pentru informatii

cu privire la precipitat si reconstituirea solutie si despre

manipularea specimenelor congelate, consultati sectiunea

Note Procedurale.

Procedura de Testare

Progensa PCA3

Progensa PCA3 Assay 8 501377RO Rev. 003

H. Pre-amplificarea

Temperatura ambientata in timpul procesului de pre-amplificare

trebuie sa fie de 15°C pana la 30°C. Rulati ambele suporturi in

paralel. Daca utilizati o Baie de Incalzire Uscata/Vortexer SB100,

consultati fisa de utilizare a SB100. Daca utilizati un instrument

TECAN Freedom EVO 100/4, consultati fisa de utilizare TECAN

Freedom EVO pentru mai multe instructi uni.

1. Omogenizati in totalitate Reactivul de Captare a Tintei (TCR)

prin rotire sau intoarcere. Utilizand pipeta multicanal,

adaugati 100 µL al TCR specific analitului in tubul de reactie

corespunzator.

2. Intepati capacul fiolei Calibratorului cu ajutoril

micropipetorului si adaugati 400 µL de Calibrator in tubul de

reactie etichetat corespunzator. Utilizand acelasi varf de

pipeta, extrageti replicate suplimentare din fiola prin capacul

intepat. Utilizati varfuri noi de pipete pentru fiecare fiola de

Calibrator. Repetati procedura pentru adaugarea

Controalelor si specimenelor. Acoperiti si pastrati proce rest

de specimen si pastrati la temperaturi de 8°C sau mai

scazute (a se vedea Recoltarea, Transportul si Pastrarea

Specimenelor pentru mai multe informatii) pentru cazul in

care este necesara retestarea.

3. Acoperiti TTU-urile cu cardul(rile) de sigilare si agitati usor

suportul cu mana. Nu agitati cu ajutorul vortexului.

Incubati suportul la 62°C ± 1°C intr-o baie de apa timp de 30

± 5 minute.

4. Scoateti suportul din baia de apa si stergeti partea inferioara

a tuburilor cu un material absorbant.

5. Asigurati-va de faptul ca toate cartele de sigilare sunt in

pozitie. Daca este neces, inlocuiti-le cu noi cartele de sigilare

si sigilati ferm TTU-uri le.

6. Agitati suportul timp de 60 de secunde cu ajutorul

agitatorului vortex multi-tub (a se vedea sectiunea Note

Procedurale). Incepeti operatiunea de agitare in decurs de 2

minute de la scoaterea suportului din baia de apa.

7. Fara a inlatura cartelele de sigilare, incubati suportul la

temperatura camerei timp de 30 ± 5 minute.

8. Asezati suportul cu capatul Frontal inainte pe baza

magnetica a TCS timp de 5 pana la 10 minute. Incarcati

suportul TTC cu TTC-uri.

9. Incarcati liniile pompei statiei de distributie prin pomparea

Solutiei de Spalare prin tuburile de distributie. . Pompati

suficient lichid in sistem astfel incat sa nu existe bule de aer

pe linie si astfel incat lichidul sa curga constant prin toate

cele 10 duze.

10. Porniti pompa vacuum si deconectati tubul aspiratorului de la

primul conector dintre aspirator si recipientul de condensare.

Asigurati-va de faptul ca masura standard a vacuumului

respecta specificatiile testului de scurgere. Poate dura 15

secunde pentru a realiza aceasta citire. Reconectati tubul, si

asigurati-va de faptul ca masura standard a vacuumului

respecta specificatiile nivelului de vacuum. Lasati pompa

vacuum pornita pana cand pasii de captare a tintei sunt

finalizati si tubulatura de aspirare este uscata.

Pentru mai multe informatii consultati Fisa de Specificatii a

Vacuumului Sistemului de Captare a Tintei care se

regaseste la sfarsitul Manualului Operatorului Sistemului de

Captare a Tintei sau contactati Departamentul de Suport

Tehnic al Gen-Probe.

11. Ataşaţi în mod ferm racordul de aspirare la primul set de

vârfuri. Coborâţi vârfurile în primul TTU până când vârfurile

intră în contact cu suprafaţa lichidului. Menţineţi contactul

vârfurilor cu suprafaţa lichidului pe măsură ce vârfurile se

deplasează în jos, până când acestea intră în contact cu

partea de jos a tuburilor. Loviţi încet vârfurile de partea de

jos a tuburilor până când întreaga cantitate de lichid rămasă

este îndepărtată. Nu ţineţi vârfurile în co ntact prelungit cu

partea de jos a tuburilor şi nu loviţi vârfurile prea rapid,

pentru a evita formarea de spumă în exces în rezervorul cu

vacuum.

12. Dupa ce actiunea de aspirare a fost finalizata, expulzati

varfurile in cutia initiala a acestora. Repetati pasii de aspirare

pentru TTU-urile ramase, utilizand un varf distinct pentru

fiecare tub de reactie.

13. Pozitionati tubul de distributie pe deasupra fiecarui TTU si,

utilizand pompa statiei de distributie, picurati 1,0 mL de

Solutie de Spalare in fiecare tub al TTU-ului.

14. Acoperiti tuburile cu o cartela de sigilare si luati suportul de

pe TCS. Agitati o data pe agitatorul vortex multi-tub. Pentru

mai multe informatii consultati sectiunea Note Procedurale.

15. Asezati suportul pe baza magnetica a TCS timp de 5 pana la

10 minute.

16. Aspirati tot lichidul conform Pasilor 11 si 12.

17. Dupa efectuarea ultimei aspirari, luati suportul din baza TCS

si verificati vizual tuburile pentru a va asigura ca intreg

lichidul a fost aspirat, si toate tuburile contin granule de

particule magnetice. Daca mai exista lichid, reasezati

suportul pe baza TCS pentru 2 minute, si repetati aspirartia

pentru acel TTU utilizand aceleasi varfuri folosite anterior

pentru fiecare tub de reactie. Daca VREO granula de

particula magnetica este vizibila dupa ce operatiunea de

aspirare este completa, tubul poate fi acceptat. Daca nici o

granula nu este vizibila, specimenul trebuie retestat. Daca

acelasi specimen nu contine nici o granula de particule

magnetice intr-un ciclu de rulare ulterior, acest lucru poate

indica o problema legata de specimen. In aceasta situatie,

se recomanda o noua recoltare a unui specimen de urina.

I. Amplificarea

Nota. Adaugarea Enzimei intr-un suport de reactie (Pasii 6 si

7 de mai jos) trebuie efectuata in 90 de secunde sau mai

putin.

Efectuati Pasii 6 si 7 pe un singur suport inainte de repetare pe

cel de-al doilea. Daca utilizati a Baie de Apa/Vortexer SB100,

consultati fisa de utilizare a SB100. Daca utilizati instrumentul

TECAN Freedom EVO 100/4, consultati fisa de utilizare a TECAN

Freedom EVO pentru mai multe informatii.

1. Utilizand o pipeta multicanal, adaugati 75 µL de Reactiv de

Amplificare reconstituit specific fiecarui analit in fiecare tub

de reactie. Toate amestecurile de reactie din suport trebuie

sa fie de culoare rosie.

2. Utilizand o pipeta multicanal, adaugati 200 µL de Reactiv

Ulei.

3. Acoperiti tuburile cu cartele de sigilare si agitati cu ajutorul

agitatorului vortex multi-tub.

4. Incubati suportul in baia de apa pre-amp la 62°C ± 1°C timp

de 10 ± 5 minute.

5. Transferati suportul intr-o baie de apa la 42°C ± 1°C timp de

5 ± 2 minute.

Progensa PCA3

Note Procedurale

Progensa PCA3 Assay 9 501377RO Rev. 003

6. Mentinand suportul in baia de apa, inlaturati cu atentie

cardul de sigilare si, utilizand o pipeta multicanal, adaugati

25 µL din Reactivul Enzimei reconstituit in fiecare dintre

amestecurile de reactie. Toate reactiile trebuie sa fie acum

de culoare portocalie.

7. Acoperiti imediat tuburile cu o noua cartele de sigilare,

scoateti suportul din baia de apa, si omogenizati repede

reactiile prin agitarea usoara cu mana.

Nota. Minimizati perioada de timp in care suportul este

mentinut inafara baii de apa pentru a evita racirea tuburilor.

8. Incubati suportul la 42°C ± 1°C timp de 60 ± 5 minute.

J. Post-Amplificarea

Pipeta multicanal utilizata in procesul de hibridizare si selectie

trebuie alocata numai acestor pasi (a se vedea sectiunea

Atentionari si Masuri de Precautie). Temperatura ambientala in

timpul operatiunii de post-amplificare, incluzand procesul de

detectie, trebuie sa fie de 15°C pana la 30°C. Daca utilizati Baia

de Incalzire Uscata/Vortexer SB100 Dry, consultati fisa de

utilizare a SB100.

1. Hibridizarea

a. Scoateti suportul din baia de apa de pre-amplificare si

transferati-l in zona de post-amplificare. Adaugati 100

µL din Reactivul Probei reconstituite specific analitului,

utilizand o pipeta multicanal. Toate amestecurile de

reactie trebuie sa fi acum de culoare galbena.

b. Acoperiti tuburile cu cartele de sigilare si agitati cu

ajutorul agitatorului multi-tub vortex timp de 10 secunde,

sau pana cand culoarea este uniforma.

c. Incubati suportul intr-o baie de apa la 62°C ± 1°C timp

de 20 ± 5 minute.

d. Scoateti suportul din baia de apa si incubati la

temperatura camerei timp de 5 ± 1 minute.

2. Selectia

a. Utilizand pipeta multicanal, adaugati 250 µL de Reactiv

de Selectie in fiecare tub. Toate reactiile ar trebui sa fie

acum de culoare roz.

b. Acoperiti tuburile cu cartele de sigilare, agitati cu

ajutorul vortex-ului timp de 10 secunde, sau pana cand

culoarea este uniforma, si incubati suportul intr-o baie

de apa la 62°C ± 1°C timp de 10 ± 1 minute.

c. Scoateti suportul din baia de apa. Incubati suportul la

temperatura camerei timp de 15 ± 3 minute.

K. Detectia

Pentru utilizarea Luminometrului Leader HC+ consultati Manualul

de Operare al Luminometrului Leader HC+. Pentru utilizarea

Programului Analizei Progensa PCA3, consultati Quick Reference

Guide (Ghidul Rapid de Referinta) sau Manualul Operatorului si

Manualul Administratorului de Sistem al Programului Analizei

Progensa PCA3.

1. Pregatiti Luminometrul Leader HC+ prin asezarea unui TTU

gol in pozitia numarul 1 a casetei si o data efectuati

protocolul de SPALARE.

2. Asigurati-va ca exista cantitati suficiente de reactivi Auto

Detect 1 si 2 pentru a finaliza reactiile.

3. Incarcati TTU-urile in luminometru utilizand drept ghid

schema din luminometru. Daca testati ambii analiti (rulare

back-to-back), incarcati intai toate TTU-urile PCA3, urmate

imediat de toate TTU-urile PSA.

4. Logati-va la computer. Dati clic pe NEW RUN (CICLU NOU

DE RULARE) si selectati protocolul si co ncentratiile aferente

analizei. Selectati NEXT (CONTINUATI) pentru a incepe

ciclul de rulare.

Nota. Ciclul de rulare trebuie finalizat in decurs de 2 ore de

la terminarea etapei de selectie prin incubare la 62°C.

5. Pregatiti Lichidul de Dezactivare prin amestecarea unor

volume egale de solutie de hipoclorit de sodiu de 5% pana la

7% (0,7 M pana la 1,0 M) si Tampon pentru Lichid de

Dezactivare intr-un recipient din plastic cu capac cu

diametrul mare. Aplicati o eticheta si scrieti data de expirare

pe recipientul din plastic. Aceasta solutie tamponata de

dezactivare cu hipoclorit de sodiu este stabila timp de 4

saptamani la temperatura camerei.

6. Cand ciclul de rulare a luat sfarsit, soft-ul analizei va genera

doua rapoarte ale ciclurilor de rulare, un Raport Brut al

Rularii si un Raport al Proportiilor, daca ciclurile de rulare

sunt back-to-back (a se vedea sectiunile Proceduri de

Control de Calitate si Interpretarea Rezultatelor).

7. Cand ciclul de rulare a luat sfarsit, scoateti TTU-urile utilizate

din luminometru si asezati TTU-urile in recipientul cu Lichid

de Dezactivare. Lasati TTU-urile in recipient timp de cel

putin 15 minute inainte de a le arunca. Metodele

corespunzatoare de manipulare si indepartare (aruncare)

trebuie stabilite de catre directorul laboratorului.

Note Procedurale

Progensa PCA3

Progensa PCA3 Assay 10 501377RO Rev. 003

Note Procedurale

A. Pregatirea Specimenelor

1. Daca specimenele contin precipitate suspendate, incalziti la

37°C timp de pana la 5 minute dupa care intoarceti usor

tubul specimenului. In cazul in care precipitatul nu se

reconstituie solutie, asigurati-va de faptul ca precipitatul nu

impiedica distributia specimenului.

2. Specimenele congelate trebuie dezghetate la temperatura

camerei (15°C pana la 30°C, se poate utiliza o baie de apa)

intorcand ocazio nal fiolele in timpul procesului de

dezghetare pentru a impiedica formarea unui filtru insolubil.

Omogenizati fiolele prin usoara intoarcere de indata de

gheata din interiorul fiolei s-a topit destul incat sa se

desprinda si sa se miste libera. Continuati incalzirea pana

cand specimenul este complet dezghetat si omogenizati din

nou co ntinutul fiolelor prin intoarcerea usoara a acestora.

a. Daca se formeaza un dop, iar specimenele vor fi

pipetate cu ajutorul instrumentului TECAN Freedom

EVO 100/4, congelati specimenul, repetati instructiunile

de dezghetare si asigurati-va ca nici un dop nu se va

forma. Daca nu puteti elimina dopul, specimenul trebuie

pipetat manual.

b. Daca se formeaza un dop, iar specimenele vor fi

pipetate manual cu micropipeta, nu sunt necesare alte

operatiuni, dar asigurati-va ca dopul nu va impiedica

extragerea specimenului.

B. Pipetarea Controlului, a Calibratorului, si a Specimenului

1. Volumele de calibrator, control, sau specimen adaugate in

TTU trebuie sa fie de 400 µL. Pentru a asigura transferul

unui unei cantitati adecvate, se recomanda verificarea

vizuala a volumului pipetat in TTU. Pentru obtinerea unor

rezultate corecte, este necesar un volum corespunzator.

2. Asigurati-va de faptul ca varful este atasat pipetei in mod

corect si verificati astfel incat volumului setat sa fie corect.

Se recomanda verificarea vizuala a setarii volumului la

finalul fiecarui TTU (a fiecare 10 tuburi). Atunci cand

extrageti proba, eliberati pisto nul pipetei incet si cu viteza

constanta, pentru a evita producerea spumei sau a bulelor

de aer.

C. Reactivii

1. Solutia de Reconstituire a Probei poate forma precipitat in

timpul depozitarii. Incalziti solutia la 62°C ± 1°C timp de 1

pana la 2 minute. Dupa aceasta etapa de incalzire, Solutia

de Reco nstituire a Probei poate fi utilizata chiar daca inca

mai exista precipitat rezidual. Dupa resuspendare,

omogenizati fiola prin intoarcere usoara.

2. Cand pipetati alti reactivi decat cel al Enzimei, atingeti usor

peretele lateral al partii inferioare a tubului de reactie (unde

partea inferioara se curbeaza pentru a intalni peretii tubului).

Cand pipetati Reactivul Enzimei, atingeti direct partea din

centru a tubului de reactie. Confirmati vizual faptul ca

reactivii sunt dispensati in mod corect (fara cantitati de

reactiv in exces pe lateralele tuburilor si schimbarea

corespunzatoare a culorii).

D. Temperatura

1. Etapele de captare a tintei, de amplificare, de hibridizare, si

de selectie sunt dependente de temperatura. Astfel, este

obligatoriu ca baile de apa sa fie mentinute in limitele de

temperatura specificate.

2. Temperatura camerei este definita ca fiind de 15°C pana la

30°C.

E. Timpul

Reactiile de captare a tintei, de amplificare, de hibridizare, si de

selectie sunt toate dependente de timp. Respectati timpii specifici

mentionati in sectiunea Procedura de Testare.

F. Agitarea (cu ajutorul Vortex-ului)

Agitarea corespunzatoare este importanta pentru efectuarea cu

succes a Analizei Progensa PCA3. Pentru a agita tuburile de

reactie, setati pe minim viteza agitatorului votex de tip multi-tub,

fixati bine suportul, si porniti echipamentul. Mariti usor viteza pana

cand lichidul urca pana la jumatatea tubului. Agitati cu ajutorul

vortex-ului timp de 10 secunde, co nform timpului indicat, sau

pana cand culoarea este uniforma. Reglati viteza pe treapta cea

mai joasa inainte de a opri agitatorul vortex multi-tub si inainte de

a inlatura suportul. Amestecurile de reactie nu ar trebui sa atinga

niciodata cartelele de sigilare.

G. Baile de Apa

1. Nivelul apei din baile de apa trebuie mentinut la 3,8 pana la

5,0 cm (1,5 pana 2,0 in.) in adancime, masurat de la tavita

de sprijin de metal (de pe partea inferioara a baii de apa)

pana la suprafata apei. Aceasta co nditie va asigura

transferul corespunzator de caldura.

2. Pentru a evita contaminarea incrucisata, baile de apa trebuie

alocate unor etape specifice ale analizei.

H. Decontaminarea

1. Suprafetele si pipetoarele

Suprafetele de lucru din laborator si pipetoarele trebuie

decontaminate in mod regulat cu solutie de hipoclorit de

sodiu de 2,5% pana la 3,5% (0,35 M pana la 0,5 M). Lasati

solutia de hipoclorit de sodiu sa intre in contact cu

suprafetele timp de cel putin 1 minut, apoi clatiti cu apa. Nu

lasati solutia de hipoclorit de sodiu sa se usuce. Solutiile

ce contin clor pot produse pete de rugina pe echipament si

metal. Clatiti bine cu apa echipamentul, pentru a evita petele

de rugina.

2. Tuburile de Aspirare ale TCS

Dupa fiecare utilizare:

a. Dati la o parte tuburile de distributie.

b. Asezati un nou TTC in suportul pentru TTC. Porniti

pompa vacuum. Atasati tubulatura de aspirare de

varfurile din TTC. Aspirati toata Solutia de Spalare

ramasa in canalul de alimentare al statiei de distributie.

c. Turnati in canalul de alimentare cel putin 100 mL de

solutie hipoclorit de sodiu de 0,5% pana la 0,7% (0,07

M pana la 0,1 M), sau daca preferati de 2,5% pana la

3,5% (0,35 M pana la 0,5 M). Aspirati toata solutia prin

tuburile de aspirare.

d. Turnati cel putin 100 mL de apa deionizata in canalul

de alimentare. Aspirati toata apa prin tuburile de

aspirare.

Progensa PCA3

Proceduri de Control de Calitate

Progensa PCA3 Assay 11 501377RO Rev. 003

e. Expulzati varfurile in TTC-ul lor initial.

f. Lasati pompa vacuum pornita pana ce tuburile raman

uscate pentru a preveni fluxul invers (timp de

aproximativ 3 minute).

g. Decontaminati suprafetele sistemului de aspirare

conform celor descrise in sectiunea TCS Unit.

3. Recipinetul pentru reziduuri al TCS

Curatati recipientul pentru rezuduuri cel putin o data pe

saptamana sau atunci cand recipientul pentru rezuduuri este

25% plin, oricare dintre aceste situatii ar interveni prima.

a. Opriti pompa vacuum si lasati presiunea vacuum sa se

egalizeze.

b. Desfaceti racordurile de deconectare rapida dintre

recipientul pentru reziduuri si recipientul pentru prea-

plin, si recipientul pentru reziduuri si tuburile de aspirare.

c. Inlaturati recipientul pentru reziduuri din locasul

rezervorului de vid.

d. Inlaturati capacul si adaugati 400 mL de solutie

hipoclorit de sodiu de 5% pana la 7% (0,7M pana la

1,0M) in recipientul pentru reziduuri de 4 L.

Nota. Aceasta operatiune poate fi efectuata in dreptul

unei hote pentru a evita eliberarea de aburi in laborator.

e. Puneti capacul recipientului pentru reziduuri si rotiti

usor continutul pana la omogenizarea completa.

f. Lasati recipientul pentru reziduuri cu solutia cu clor timp

de cel putin 15 minute si apoi aruncati co ntinutul

(reziduurile).

g. Clatiti recipientul pentru reziduuri cu apa pentru a

indeparta reziduurile ramase in interiorul acestuia.

h. Puneti capacul recipientului pentru reziduuri gol si

asezati-l in locasul rezervorului de vid. Reatasati

racordurile de deconectare rapida la unitatea TCS.

Inlaturati cu atentie ambele manusi.

4. Unitatea TCS

Stergeti suprafetele unitatii TCS, sistemul de tuburi de

aspirare, si Spalati cu solutia Buffer suprafata dispozitivelor

de ejectare a varfurilor cu prosoape de hartie umezite in

solutie de hipoclorit de sodiu de 2,5% pana la 3,5% (0,35 M

pana la 0,5 M). Etapa de folosire a solutiei de hipoclorit de

sodiu trebuie urmata de etapa de clatire cu apa, apoi de cea

de uscare completa a suprafetelor cu prosoape de hartie.

5. Suporturile

Scufundati suporturile in solutie de hipoclorit de sodiu de

2,5% pana la 3,5% (0,35 M pana la 0,5 M), asigurandu-va ca

suporturile sunt acoperite de solutie. Mentineti suporturile

scufundate timp de 10 minute. Expunerea mai indelungata

va deteriora suporturile. Clatiti suporturile temeinic cu apa,

apoi uscati-le cu prosoape de hartie.

I. Contaminarea testelor

1. Introducerea materialelor contaminante poate avea loc

in cazul in care procedura de testare nu este respectata

cu rigurozitate.

2. TTU-urile trebuie decontaminate in Lichid de

Dezactivare conform indicatiilor din sectiunea

Procedura de Testare. Nu refolositi TTU-urile.

3. Efectuati in mod regulat operatiunea de decontaminare

a echipamentelor si a suprafetelor de lucru conform

indicatiilor de mai sus din sectiunea Decontaminarea.

4. Ca i n orice sistem de reactivi, pudra in exces de pe

unele tipuri de manusi poate duce la contaminarea

tuburilor neacoperite. Se recomanda ca operatorii sa

utilizeze manusi fara pudra.

Interpretarea Rezultatelor

Progensa PCA3

Progensa PCA3 Assay 12 501377RO Rev. 003

Proceduri de Control de Calitate

A. Valabilitatea Ciclurilor de Rulare

1. Calibratorii si controalele trebuie rulate cu toate testele pe acelasi suport cu specimenele de testare. Trebuie respectate urmatoarele criterii

pentru ca un ciclu de rulare sa fie considerat valabil:

Valoarea medie a RLU ale Calibratorului 2 > RLU ale Cutoff-ului

Unde RLU ale Cutoff-ului = RLU medie a Calibratorului 1

+ 1,645 deviatiile standard ale replicatelor RLU ale Calibratorului 1

+ 1,645 deviatiile standard ale replicatelor RLU ale Calibratorului 2.

Reproductibilitatea mediei de interpretare a Calibratorului 5 = 100 ± 30%

Reproductibilitatea mediei de interpretare a Controlului A = 100 ± 60%

Reproductibilitatea mediei de interpretare a Controlului B = 100 ± 35%

2. Soft-ul PCA3 evalueaza in mod automat rezultatele in comparatie cu criteriile indicate de mai sus si va raporta Statusul Ciclului de Rulare

drept REUSIT (PASS) daca sunt respectate criteriile de valabilitate, sau va raporta Statusul Ciclului de Rulare drept NEREUSIT (FAIL) in

cazul in care criteriile de valabilitate nu sunt respectate.

3. Daca Statusul unui Ciclu de Rulare este indicat ca fiind NEREUSIT, toate rezultatele testelor din acelasi ciclu de rulare sunt invalide pentru

acel analit si nu trebuie transmise.

4. Daca un ciclul de rulare este invalid, ciclul de rulare trebuie repetat pentru acel analit (a se vedea sectiunea Interpretarea Rezultatelor). Daca

un ciclul de rulare este valid pentru celalalt analit, acele rezultate pot fi folosite in analiza datelor impreuna cu rezultatele obtinute dupa

repetarea si validarea ciclului de rulare ale primului analit.

B. Valabilitatea Specimenului

In cadrul unui ciclu de rulare valid, rezultatele individuale ale specimenelor pot fi considerate drept INVALIDE si acest lucru va fi indicat in Raportul

Brut al Ciclurilor de Rulare (a se vedea sectiunea Interpretarea Rezultatelor). Cu toate ca replicatele individuale pentru un specimen pot fi valide,

un specimen va fi invalidat daca diferenta interpolata c/mL dintre replicate depaseste 600%. Testarea specimenului pentru acel analit trebuie

repetata.

Interpretarea Rezultatelor

A. Tipuri de Rapoarte

1. Raportul Brut al Ciclului de Rulare

Raportul Brut al Ciclului de Rulare furnizeaza informatii cu privire la validitatea ciclului de rulare (PASS sau FAIL; a se vedea sectiunea

Proceduri de Control de Calitate) si cu privire la tuburile individuale de reactie testate in cadrul Analizei Progensa PCA3. Daca un ciclu de

rulare este invalid (FAIL), toate tuburile din acel ciclu de rulare vor fi marcate ca fiind invalide. Totusi, tuburile individuale pot fi considerate

invalide in cadrul unui ciclu de rulare valid (PASS). In cazul ciclurilor de rulare back-to-back (adica ambii analiti PCA3 si PSA sunt testati in

acelasi ciclu de rulare al analizei), ciclul de rulare al unuia dintre analiti poate fi invalid, in timp ce ciclul de rulare al celuilalt analit este valid.

Rezumatul Exceptiilor se regaseste la finalul Raportului Brut al Ciclului de Rulare. In cazul ciclurilor de rulare back-to-back in care ambele

cicluri de rulare ale analitilor sunt valide, specimenele inregistrate in Rezumatul Exceptiilor pot necesita retestarea unuia dintre analiti. Desi un

rezultat al Scorului PCA3 poate fi inregistrat in Rezumatul Exceptiilor, acest rezultat nu este considerat raportabil pana cand nu se efectueaza

interpretarea manuala si pana cand rezultatul nu este inregistrat in Raportul Proportiilor. Daca numai unul dintre analiti a fost testat sau daca

ciclul de rulare al unuia dintre analiti este invalid, toate specimenele testate vor fi inregistrate in Rezumatul Exceptiilor.

2. Raportul Proportiilor

Softul analizei genereaza in mod automat un Raport al Proportiilor pentru ciclurile de rulare back-to-back in care ambele cicluri de rulare ale

analitilor sunt valide. Soft-ul calculeaza si indica Scorul PCA3 al specimenelor in Raportul Proportiilor. Specimenele indicate in Raportul

Proportiilor fie nu mai necesita testarea suplimentara, fie ambii analiti trebuie retestati. Specimenele neinregistrate in Raportul Proportiilor se

vor regasi in sectiunea Rezumatul Exceptiilor a Raportului Brut al Ciclului de Rulare.

Un Raport al Proportiilor poate fi de asemenea generat dupa interpretarea manuala (pentru mai multe informatii, consultati Interpretarea

Manuala).

3. Raportul QC (al Controlului de Calitate)

Raportul QC indica criteriile de validitate ale ciclului de rulare, concentratiile atribuite si interpretate, si reproductibilitatea calibratorilor si

controalelor. Raportul indica de asemenea parametrii care definesc curba de calibrare rezultata din determinarea celor patru parametrii

standard (3). Pentru mai multe informatii, consultati Manualul Operatorului Soft-ului pentru Analiza Progensa PCA3.

Progensa PCA3

Interpretarea Rezultatelor

Progensa PCA3 Assay 13 501377RO Rev. 003

B. Interpretarea

1. Interpretarea Automata

In cazul ciclurilor de rulare back-to-back in care ambele cicluri de rulare ale analitilor sunt valide, soft-ul interpreteaza in mod automat

rezultatele individuale ale analitilor PCA3 si PSA pentru specimene si determina Scorul PCA3 (daca acesta poate fi calculat). Rezultatele sunt

indicate in Raportul Proportiilor sau in Rezumatul Exceptiilor al Raportului Brut al Ciclului de Rulare.

2. Interpretarea Manuala

Cand analitii PCA3 si PSA sunt testati in cicluri de rulare diferite, soft-ul nu poate determina in mod automat Scorul PCA3. Este necesara

interpretarea manuala a rezultatelor analitilor pentru a determina Scorul PCA3 sau intervalul Scorului PCA3 (consultati Ghidul Rapid de

Referinta (Quick Reference Guide) sau Manualul Operatorului Soft-ului pentru Analiza Progensa PCA3). Interpretarea manual poate fi de

asemenea necesara pentru rezultatele inregistrate in Rezumatul Exceptiilor al Raportului Brut de Rulare. Dupa interpretarea manuala,

Scorul(rile) PCA3 pentru specimenul(ele) interpretat va(vor) fi inregistrat(e) intr-un nou Raport al Proportiilor.

C. Interpretarea Rapoartelor

1. Scorul PCA3

Nota. Numai Scorurile PCA3 si intervalul Scorului PCA3 inregistrate in Raportul Proportiilor sunt raportabile. Rezultatele care apar in

Rezumatul Exceptiilor pot necesita testari suplimentare si nu sunt raportabile.

Scorul PCA3 este calculat ca fiind raportul dintre copiile ARN PCA3 si copiile ARN PSA, inmultit cu 1000. Scorurile PCA3 pot fi calculate

numai utilizand rezultate obtinute din cicluri de rulare si specimene valide. Ciclurile de rulare invalide si specimenele invalide trebuie retestate

pentru analitul respectiv (pentru mai multe informatii, consultati sectiunea Retestarea).

Daca Scorul PCA3 raportat este sub valoarea cutoff-ului, rezultatul ar trebui interpretat ca fiind NEGATIV. Daca Scorul PCA3 este situat

deasupra sau este egal cu valoarea cutoff-ului, rezultatul ar trebui interpretat ca fiind POZITIV. Directorul laboratorului va stabili valoarea

cutoff (pentru mai multe informatii, consultati sectiunea Caracteristici de Performanta).

In anumite conditii, este furnizat intervalul Scorului PCA3 (>[Scorul PCA3 Calculat] sau <[Scorul Calculat]). Daca <[Scorul PCA3 Calculat] se

situeaza sub cutoff, rezultatul ar trebui interpretat ca fiind NEGATIV. Daca >[Scorul PCA3 Calculat] este situat deasupra cutoff-ului, rezultatul

ar trebui interpretat ca fiind POZITIV. Daca este necesara o valoare numerica, diluarea si retestarea specimenului pot genera un Scor PCA3

in loc de un interval al Scorului PCA3 (a se vedea Retestarea – Dilutia Specimenelor care se inscriu In Afara Intervalului Superior).

2. Interpretarea Codurilor Statusurilor si al Analizelor

Coloana Statusului, atat din Raportul Brut al Ciclului de Rulare cat si din Raportul Proportiilor indica informatiile in format "s:a". Codurile

specifice ciclurilor de rulare ("s") sunt indicate inaintea (in partea stanga a) coloanei si codurile analizei analit-specifice ("a") sunt indicate dupa

(in partea dreapta a) coloana. Codurile analit-specifice sunt indicate cu majuscule pentru rezultatele PCA3 si cu litere mici pentru rezultatele

PSA. Fiecare raport contine descrierile codurilor statusurilor si al analizelor care apar in acel raport. De exemplu, codurile pot indica daca un

specimen sau un replicat este valid sau daca se situeaza in afara intervalului. Consultati Ghidul Rapid de Referinta (Quick Reference Guide)

sau Manualul Operatorului Soft-ului pentru Analiza Progensa PCA3 pentru a obtine lista completa a codurilor statusurilor si al analizelor si alte

detalii.

Daca un Scor PCA3 este raportat in Raportul Proportiilor si daca pe coloanele Statusului PCA3 sau PSA nu apare nici un cod al statusului sau

al analizei, acest lucru inseamna ca ambii analiti testati au avut rezultate valide sau "in interval." Rezultatul specimenului poate fi transmis si

nu mai sunt necesare alte operatiuni.

In cazul in care codul statusului sau al analizei apare in Rezumatul Exceptiilor sau in Raportul Proportiilor, retestarea poate fi necesara (a se

vedea Interpretarea Rezultatelor din Rezumatul Exceptiilor si Interpretarea Rezultatelor din Raportul Proportiilor). Daca rezultatele analitilor

provin din cicluri de rulare diferite si au un cod (sau coduri) de analiza, combinatia pentru ambii analiti, in vederea determinarii daca alte

operatiuni suplimentare sunt sau nu necesare, se regaseste in Tabelul 4a sau Tabelul 4b.

Nota. Presenta unui cod de status sau de analiza nu implica in mod automat necesitatea unei retestari.

3. Interpretarea Rezultatelor din Rezumatul Exceptiilor

Este posibil ca Rezumatul Exceptiilor sa nu redea nici o exceptie. In aceste cazuri, nu sunt necesare alte operatiuni suplimentare.

Daca Rezumatul Exceptiilor indica un(niste) specimen(e) pentru ciclurile de rulare back-to-back in care ambele cicluri de rulare ale analitilor

sunt valide, consultati Tabelul 4 pentru mai multe instructiuni.

Pentru cucluri de rulare individuale, consultati sectiunea Interpretarea Codurilor Statusurilor si al Analizelor. In cazul ciclurilor de rulare back-

to-back in care un ciclu de rulare al analitului este invalid, retestati ciclul de rulare invalid (pentru mai multe informatii, a se vedea sectiunea

Retestarea), si luati in co nsiderare rezultatele ca si cum ciclurile de rulare individuale ale analitului au fost efectuate. Va fi necesara

interpretarea manuala.

Un specimen poate fi etichetat drept invalid desi tuburile individuale (replicatele) pot fi etichetate drept valide. Rezultatul combinat al al

replicatelor este acela care determina validitatea specimenului, si o diferenta mare intre replicate va invalida un specimen (pentru mai multe

informatii, consultati sectiunea Proceduri de Control de Calitate).

Interpretarea Rezultatelor

Progensa PCA3

Progensa PCA3 Assay 14 501377RO Rev. 003

Tabelul 4: Conditiile Rezumatului Exceptiilor Analizei Progensa PCA3

Rezultatul PCA3

(Codul Analizei *)

Rezultatul PSA

(Codul Analizei *)

Scorul PCA3

Inregistrat

Testare

Suplimentara?

Operatiune/

Comentariu

Se inscrie in interval

(nici un cod)

Invalid**

(A, B, E, H, sau I)

-- Da

Retestati PSA (vezi

Retestarea) si interpretati manual rezultatele.

In afara intervalului

inferior

(g)

Invalid

(A, B, E, H, sau I) -- Da

Retestati PSA

(vezi Retestarea) si interpretati manual rezultatele.

Invalid

(a, b, e, h, s au i)

Se inscrie in interval

(nici un cod)

-- Da

Retest PCA3 (vezi Retestarea) and interpretati manual

rezultatele.

Se inscrie in interval

(nici un cod)

In afara intervalului

superior

(F)

<[Scorul PCA3

Calculat]*** Optional

1. Interpretati manual pentru a obtine <[Scorul PCA3 Calculat]

2. Diluati specimenul in diluantul pentru specimen (vezi

Dilutia

Specimenelor care se inscriu in afara intervalului superior

retestati PSA, si interpretati manual rezultatele daca este necesar

un Scor PCA3.

In afara intervalului

superior

(f)

Se inscrie in interval

(nici un cod)

>[Scorul PCA3

Calculat] Optional

1. Interpretati manual pentru a obtine >[Scorul Calculat] SAU

2. Diluati specimenul in diluantul pentru specimen, retestati

PCA3, si interpretati manual

rezultatele daca este necesar un

Scor PCA3.

In afara intervalului

inferior

(g)

Se inscrie in interval

(nici un cod)

<[Scorul PCA3

Calculat] Nu

Interpretati manual pentru a obtine <[Scorul

PCA3 Calculat].

In afara intervalului

inferior

(g)

In afara i ntervalului

superior

(F)

<[Scorul

PCA3Calculat] Nu

Interpretati manual pentru a obtine <[Scorul

PCA3 Calculat].

*Pentru lista completa a codurilor analizelor, consultati Manualul Operatorului softului Analizei Progensa PCA3.

**Se aplica numai in cazul specimenelor invalide din cadrul unui ciclu de rulare valid.

***Pentru valorile inscrise in afara intervalului, Scorul Calculat este obtinut utilizand nivelurile de copiere pentru cel mai apropiat calibrator pozitiv.

4. Interpretarea Rezultatelor din Raportul Proportii lor

Daca un specimen este regasit in Raportul Proportiilor cu un Scor PCA3, rezultatul este un Scor PCA3 reportabil si nu sunt necesare

operatiuni suplimentare. Daca nu este inregistrat nic un Scor PCA3, fapt exprimat prin semnul "--" in coloana Scorului PCA3, co nsultati

Tabelul 5 pentru instructiuni.

Tabelul 5: Conditiile Raportului Proportiilor al Analizei Progensa PCA3

Rezultatul PCA3

(Codul Analizei*)

Rezultatul PSA

(Codul Analizei*)

Scor PCA3

Inregistrat

Testare

Suplimentara?

Operatiune/

Comentariu

Se inscrie in interval

(nici un cod)

Se inscrie in interval

(nici un cod)

Scor PCA3 Nu

Nu sunt necesare operatiuni suplimentare; rezultatul poate fi

transmis.

Invalid**

(a, b, e, h, sau i)

Invalid

(A, B, E, H, sau I)

-- Da

Retestati ambii analiti (vesi

Retestarea).

Invalid

(a, b, e, h, sau i)

In afara intervalului

superior

(F)

-- Da

Diluati specimenul in diluantul pentru specimen (vezi Diluarea

Specimenelor inscrise In afara intervalului superior

), retestati

ambii analiti.

In afara intervalului

superior

(f)

Invalid

(A, B, E, H, sau I) -- Da

Diluati specimenul in diluantul pentru specimen, retestati ambii

analiti.

In afara intervalului

superior

(f)

In afara intervalului

superior

(F)

-- Da

Diluati specimenul in diluantul pentru specimen, retestati ambii

analiti.

Invalid

(a, b, e, h, or i)

In afara intervalului

inferior

(G)

-- Nu

Proba nu are suficient ARN pentru o analiza exacta. Un nou

specimen trebuie recoltat de la pacient.

Se inscrie in interval

(nici un cod)

In afara intervalului

inferior

(G)

-- Nu

Proba nu are suficient ARN pentru o analiza exacta. Un nou

specimen trebuie recoltat de la pacient.

In afara intervalului

superior

(f)

In afara intervalului

inferior

(G)

-- Nu

Proba nu are suficient ARN pentru o analiza exacta. Un nou

specimen trebuie r

ecoltat de la pacient.

In afara intervalului

inferior

(g)

In afara intervalului

inferior

(G)

-- Nu

Proba nu are suficient ARN pentru o analiza exacta. Un nou

specimen trebuie recoltat de la pacient.

Progensa PCA3

Caracteristici de Performanta

Progensa PCA3 Assay 15 501377RO Rev. 003

* Pentru lista completa a codurilor analizelor, consultati Manualul Operatorului softului Analizei Progensa PCA3

** Se aplica numai in cazul specimenelor invalide din cadrul unui ciclu de rulare valid. Daca specimenele au fost invalide din cauza faptului ca ciclul de

rulare a fost invalid, rezultatele vor fi inregistrate in Rezumatul Exceptiilor (pentru mai multe informatii, vezi Interpretarea Rezultatelor din Rezumatul

Exceptiilor).

D. Retestarea

1. Linii Directoare pentru Retestare

a. Desi nu este abso lut necesar ca ambii analiti sa fie testati in cadrul aceluiasi ciclu de rulare, ambele rezultate ale analitilor trebuie sa

provina din aceeasi fiola de a probei pentru a obtine un Scor PCA3 raportabil.

b. Toate ciclurile de rulare invalide trebuie repetate si toate specimenele invalide din cicluri de rulare valide trebuie retestate.

c. Retestati specimenul(ele) utilizand un nou set de calibratori si controale.

d. Este esentiala depozitarea corespunzatoare a resturilor de specimen inainte de Retestare (pentru mai multe informatii, co nsultati

sectiunea Recoltarea, Transportul si Pastrarea Specimenelor).

e. Interpretarea manuala a analitilor PCA3 si PSA poate fi necesara pentru a determina Scorul PCA3 (pentru mai multe informatii, consultati

sectiunea Interpretarea Manuala).

2. Diluarea Specimenelor inscrise iIn afara intervalului superior

a. Daca valoarea concentratiei unui specimen este superioara valorii Calibratorului 5 in cadrul unui ciclu de rulare valid, rezultatul se inscrie

"in afara intervalului superior" si va fi marcat cu un cod de analiza "f" sau "F" in raportul(le) ciclului de rulare. Valoarea co ncentratiei va fi

indicata drept >[Valoarea concentratiei Calibratorului 5].

b. Intoarceti tubul specimenului de urina procesata pentru a omogeniza specimenul inainte de diluarea acestuia. Dilutia recomandata, dar

nu neaparat necesara, este de 1:10 utilizand Kitul Progensa PCA3 pentru Diluarea Specimenelor. Intr-o fiola corespunzatoare, adaugati

1800 µL de diluant pentru specimenele si 200 µL de specimen; puneti capacul tubului si intoarceti de cinci ori pentru o omogenizare

completa. Factorul de dilutie va fi "10" in lista de lucru a ciclului de rulare. In cazul in care ambii analiti vor fi retestati, dublati volumele

(utilizati 3600 µL de diluant pentru specimen si 400 µL de specimen). Consultati insertul tehnic al Kitului Progensa PCA3 pentru Diluarea

Specimenelor. Testati specimenul diluat cu analiza.

c. In cazul in care, dupa retestare, rezultatul specimenului se situeaza tot in afara intervalului superior, este necesara o noua diluare oana

cand rezultatul specimenului se inscrie in intervalul calibratorilor. Diluarea ulterioara celei initiale de 1:10 este permisa, cu conditia ca

dilutia initiala de 1:10 sa fi fost pastrata in mod corespunzator (pentru mai multe informatii, consultati sectiunea Recoltarea, Transportul si

Pastrarea Specimenelor).

Limitari

A. Analiza Progensa PCA3 nu ar trebui utilizata in cazul pacientilor aflati in tratament medicamentos despre se stie ca influenteaza nivelurile de PSA

din ser, cum ar fi finasterida (Proscar, Propecia), dutasterida (Avodart), si terapia anti-androgen (Lupron). Influenta acestor medicatii asupra

expresiei genei PCA3 nu a fost inca evaluata.

B. Anumite proceduri terapeutice si de diagnosticare, cum ar fi prostatectomia, excizia, biopsia prostatei, si altele, pot afecta caracterul viabil al

tesutului prostatei si ulterior influenteaza Scorul PCA3. Efectul acestor proceduri asupra performantei analizei nu a fost evaluat inca. Probele de

testare a PCA3 ar trebui recoltate atunci cand un medicul clinician este de parere ca tesutul prostatei s-a refacut.

C. Aceasta analiza trebuie efectuata numai de catre personal care a fost instruit in vederea realizarii acestei proceduri. Nerespectarea i ns tructiuni lor

oferite in acest insert poate duce la obtinerea unor rezultate eronate.

D. Fiecare laborator trebuie sa valideze in mod independent un proces de transfer LIS.

E. Obtinerea unor rezultate corecte depinde de recoltarea adecvata a specimenelor de urina. Din cauza faptului ca sistemul de transport utilizat pentru

aceasta analiza nu permite evaluarea microscopica a caracterului adecvat al specimenului de urina, este necesara instruirea personalului clinic cu

privire la tehnicile corespunzatoare de recoltare a specimenelor de urina. Pentru instructiuni, consultati sectiunea Recoltarea, Transportul si

Pastrarea Specimenelor. Pentru informatii detaliate, consultati insertul tehnic furnizat in Kitul Progensa PCA3 de Transport al Specimenelor de

Uri na.

F. Rezultatele Analizei Progensa PCA3 ar trebui interpretate in corelatie cu alte date clinice si de laborator furnizate medicului clinician. (Rezultatele

testelor pot fi influentate de recoltarea recoltarea necorespunzatoare a specimenelor, de erori tehnice, sau de incurcarea specimenelor.)

Caracteristici de Performanta

Progensa PCA3

Progensa PCA3 Assay 16 501377RO Rev. 003

Caracteristici de Performanta

A. Rezultate Clinice

1. Sensibilitatea si Specificitatea Diagnosticului

Caracteristicile de performanta ale Analizei Progensa PCA3 au fost stabilite utilizand specimene recoltate de la pacienti inscrisi la patru clinici

din locatii diferite din punct de vedere geografic din America de Nord. Populatia pacientilor a fost formata din 529 de barbati programati pentru

efectuarea biopsiei prostatei. Demografica pacientilor este indicata mai jos:

a. Varsta Medie ± SD = 64 ± 8 ani (media de 63, interval intre 32 si 89)

b. Nivelul mediu de PSA in ser = 7,9 ± 21,9 µg/L (5,6, 0,3 pana la 484)

c. Volumul mediu al prostatei (determinat trans-rectal prin ultrasunete) = 44 ± 25 cc (39, 5 pana la 225)

d. 34% (180/529) cu un rezultat pozitiv al biopsiei pentru cancerul de prostata

Figura 3 indica corelatia Scorului PCA3 cu probabilitatea biopsiei pozitive. Pe masura ce Scorul PCA3 a crescut, frecventa biopsiei cancer-

pozitive in randul pacientilor s-a marit.

Figura 3. Corelatia Scorului PCA3 cu Probabilitatea Biopsiei Pozitive

A fost efectuate studii privind caracteristicile de f unctionare a receptorului (ROC), utilizand drept metoda de referinta biopsia prostatei, conform

CLSI GP10-A (1995) (4). In cazul Analizei Progensa PCA3, zona sub curba (AUC) a fost de 0,685 (interval de incredere de 95% = 0,637 pana

la 0,733). Tabelul 6 indica sensibilitatea si specificitatea diagnosticului pentru valori diferite ale cutoff-ului Scorului PCA3. Fiecare laborator ar

trebui sa isi stabileasca valoarea cutoff-ului pentru sensibilitatea sau specificitatea diagnosticului (a se vedea sectiunea Interpretarea

Rezultatelor).

Tabelul 6: Sensibilitatea si Specificitatea Diagnosticului Analizei Progensa PCA3 pentru Valori Diferite ale Cutoff-ului Scorului PCA3

Val. Cutoff-ului Scorului PCA3

Sensibilitate

96%

85%

77%

63%

53%

41%

17%

Specificitate

14%

33%

47%

61%

74%

84%

95%

2. Studii de Stabilitate a Specimenelor

a. Stabilitatea in cazul specimenelor de urina integrala: Prima urina a fost recoltata de la 10 pacienti si pastrata la 2°C pana la 8°C sau la

30°C inainte de procesare prin adaugarea mediului de transport al urinei (UTM). La temperaturile de 2°C pana la 8°C, in cazul unora

dintre spcimene, dupa patru ore, s-a observat o degradare semnificativa a mARN PCA3 si PSA. Asadar, urina integrala trebuie

procesata in decurs de 4 ore. La 30°C, o degradare semnificativa a fost observata in mai putin de 1 ora. Asadar, urina integrala trebuie

intotdeauna pastrata la temperaturi scazute sau la gheata inainte de a fi procesata.

b. Stabilitatea in cazul specimenelor de urina procesata: Douasprezece specimene au fost incubate la 4°C sau 30°C timp de pana la 38 de

zile. La 4°C, ARN PCA3 si PSA au fost stabili timp de 21 de zile; la 30°C, au fost dtabili timp de 5 zile. Specimenele pastrate la -20°C si -

70°C au dovedit o stabilitate a ARN PCA3 si PSA de pana la 90 de zile.

c. Stabilitatea in cazul ciclurilor de congelare-dezghetare: Specimenele au fost supuse de 6 ori unor cicluri de congelare-dezghetare la

temperaturi intre 37°C si -70°C. Nu s-a observat nici o scadere a nivelurilor copiilor ARN PCA3 sau PSA.

Progensa PCA3

Caracteristici de Performanta

Progensa PCA3 Assay 17 501377RO Rev. 003

B. Rezultate Analitice

1. Sensibilitatea Analitica

Un panel pentru analiza sensibilitatii compus din transcript ARN in vitro, diluat, a fost utilizat pentru a evalua sensibilitatea analizei. Un

operator a testat panelul in cadrul a douasprezece cicluri de rulare a cinci replicate, utilizand un singur lot de reactivi. Limita de detectie si

limita de cuantificare au fost calculate conform CLSI EP17-A (2004) (5). Limita de detectie a analitului PCA3 a fost de 80 c/mL, iar pentru

analitul PSA limita de detectie a fost de 1.438 c/mL. Limita de cuantificare ai ambilor analiti a fost Calibratorul 2.

2. Specificitatea Analitica

a. Transcriptul necuplat: Analiza Progensa PCA3 a fost conceputa numai pentru detectia ARN PCA3 cuplat cu secventele exon 3-exon 4

specifice cancerului de prostata (2). Analiza nu a detectat 1 milion de c/mL de ARN PCA3 necuplat, semnificativ deasupra mediei.

b. Specificitatea ARN PCA3 al prostatei in urina: Specimenele recoltate de la pacienti dupa prostatectomia totala (n = 97) au fost testate cu

Analiza Progensa PCA3, iar nivelurile de ARN PCA3 au fost comparate cu cele recoltate de pa pacienti inainte de biopsie (n = 464).

Valoarea medie in c/mL a ARN PCA3 s-a situat sub limita de detectie a analizei in cazul specimenele recoltate post-prostatectomie, in

timp ce media in c/mL a ARN PCA3 in cazul specimenelor recoltate inainte de biopsie a fost de 7.243 c/mL; aceste date confirma faptul

ca ARN PCA3 in urina este determinat de prostata.

c. Specificitatea Tesutului: ARN-ul total a fost extras din tesutul a doi donatori barbati, unici din punct de vedere al tipului de tesut, adaugat

in diluant pentru specimen (10 ng per reactie), si testat cu Analiza Progensa PCA3. Tesutul prostatei a fost singurul tip de tesut detectat

peste limita de dectie a ARN PCA3 a tipurilor de tesut mentionate in Tabelul 7.

Tabelul 7: Tipurile de Tesut Barbatesc Testat pentru ARN PCA3

Tip de Tesut

Vezica urinara (Normal)

Rinichi

Vezica urinara (Tumor)

Penis

Maduva Osoasa

Prostata

Ductus deferens

Vezica Seminala

Epididymus

Testis (Testicol)

d. Substante ce interfereaza: Substantele enumerate in Tabelul 8 au fost adaugate in alicote de urina barbateasca procesata de tip pool.

Specimenele au fost testate cu Analiza Progensa PCA3 in conformitate cu CLSI EP7-A2 (2005) (6). In cazul concentratiilor mentionate,

nu s-a observat nici o influenta asupra analizei.

Tabelul 8: Substante Testate pentru Interferenta cu Analiza Progensa PCA3

Agenti Terapeutici

Agenti Terapeutici,

continuare

Agenti Terapeutici

Agenti Terapeutici,

continuare

Substanta

Concentratia Testului

Substanta

Concentratia Testului

Acetaminophen/Codeine

5,34 µmol/L

Uroxatral

30 mg/L

Atorvastatin

25 mg/L

Doxazosin

1,33 µmol/L

Lisinopril

0,74 µmol/L

Terazosin

7,8 µmol/L

Amlodipine

245 µmol/L

Finasteride

15 mg/L

Atenolol

37,6 µmol/L

Tamsulosin

1,2 µg/L

Sulfasalazine

754 µmol/L

Metformin

310 µmol/L

Esomeprazole

120 mg/L

Sildenafil

12,9 pmol/L

Allop uri no l

294 µmol/L

Saw palmetto

1600 mg/L

Diphenhydramine

19,6 µmol/L

Selenium

0,275 mg/L

Acetaminophen

1324 µmol/L

Acetylsalicylic acid

3,62 mmol/L

Constituenti ai Urinei

Ibuprofen

2425 µmol/L

Substanta

Concentratia Testului

Furosemide

181 µmol/L

Acid uric

1,4 mmol/L

Ciprofloxacin

30,2 µmol/L

Hemoglobina

2 g/L

Levaquin

48,6 µmol/L

Globule albe din sange

4,56 x 107 cells/L

Doxycycline

67,5 µmol/L

Celule rosii din sange

3,06 x 107 cells/L

Fluoxetine hydrochloride

11,2 µmol/L

Albumina

50 g/L

Flutamide

1500 mg/L

Bilirubina (neconjugata)

342 g/L

Dutasteride

1,5 mg/L

IgG

60 g/L

Caracteristici de Performanta

Progensa PCA3

Progensa PCA3 Assay 18 501377RO Rev. 003

3. Exactitate

Exactitatea Analizei Progensa PCA3 a fost evaluata in conformitate cu CLSI EP15-A2 (2005) (7). Transcriptele ARN PCA3 si PSA au fost

cuantificate prin spectrofotometrie UV-vis, apoi adaugate in urina normala, procesata, recoltata de la femei (nu s-au detectat ARN PCA3 sau

PSA), si concentratii masurate in Analiza Progensa PCA3. Procentul (%) de interpretare a fost calculat drept un raport dintre c/mL measurati

si c/mL adaugati, inmultit cu 100.

Tabelul 9: Reproductibilitatea copiei in Analiza Progensa PCA3

Analit

Concentratia Cunoscuta,

c/mL

Concentratia Masurata,

c/mL

% Reproductibilitate

PCA3

750

808

108%

7.500

7.618

102%

18.750

18.722

100%

75.000

70.287

94%

PSA

20.000

23.684

118%

250.000

278.373

111%

500.000

599.941

120%

1.750.000

1.960.775

112%

4. Linearitatea si Intervalul

Intervalul linear al Analizei Progensa PCA3 a fost determinat in conformitate cu CLSI EP6-A (2003) (8) pe baza analizei regresiei lineare

(metoda celor mai mici patrate). Doua seturi de serii de diluare au fost pregatite din specimene continand concentratii mari de ARN PCA3 si

PSA. Un set a fost diluat in urina procesata recoltata de la femei si un set a fost diluat in diluant pentru specimene. Dilutiile au parcurs intregul

interval al analizei intre valoarea cea mai scazuta si cea mai ridicata a calibratorilor pozitivi pentru fiecare. Pentru ambii analiti PCA3 si PSA,

rezultatele masurate prin analiza au indicat o relatie de direct proportionalitate intre dilutiile testate si c/mL de analit reportate. Nu a existat nici

un efect semnificativ al matricei diluantului. A se vedea Figura 4.

Figura 4. Linearitatea Analizei Progensa PCA3 pentru Analitii PCA3 si PSA

Analit PCA3 Analit PSA

y = 0.9932x + 613.87

= 0.9998

O = Specimen diluent

y = 0.9523x - 79.762

= 0.9999

∆ = Ur in e

0.0E+00

2.0E+04

4.0E+04

6.0E+04

8.0E+04

1.0E+05

1.2E+05

1.4E+05

0.0E+00 3.0E+04 6.0E+04 9.0E+04 1.2E+05

Expected c/m L PCA3

Measured c/mL PCA3

y = 1.0875x - 27939

R2 = 0.9991

O = Specimen diluent

y = 0.9663x + 27393

R2 = 0.9973

∆ = Ur in e

0.0E+00

5.0E+05

1.0E+06

1.5E+06

2.0E+06

2.5E+06

3.0E+06

0.0E+00 5.0E+05 1.0E+06 1.5E+06 2.0E+06 2.5E+06 3.0E+06

Expected c/m L PSA

Measured c/mL PSA

Progensa PCA3

Bibliografie

Progensa PCA3 Assay 19 501377RO Rev. 003

5. Precizia

Precizia Analizei Progensa PCA3 a fost evaluata in conformitate cu CLSI EP5-A2 (2004) (9). Repetabilitatea este precizia in conditii de

minima variabilitate, iar reproductibilitatea este precizia in conditii de maxima variabilitate.

Pentru repetabilitate, a fost pregatit un panel de testare alcatuit din trei componente, constand in transcript ARN in vitro, diluat. Un operator al

unei locatii a testat panelul in 20 de cicluri de rulare a 5 replicate in decurs de 20 de zile, utilizand un singur lot de calibrator si control, un lot

de reactivi, si un set de echipamente. Tabelul 10 indica precizia repetabilitatii Analizei Progensa PCA3 in cazul unor niveluri diferite de

concentratii de testare.

Tabelul 10: Repetabilitatea Analizei Progensa PCA3

Analit Component Panel

Media

c/mL

Repetabilotatea

Repetabilitatea

PCA3

1.228

145

12%

12.020

809

61.108

2.489

PSA

48.091

3.715

484.457

41.026

2.001.430

131.554

Pentru reproductibilitate, a fost pregatit un panel de testare cu 8 componente ce a constat in specimene de tip pool (1 pana la 3) si transcript ARN in

vitro, diluat (4 pana la 8). Trei operatori au testat panelul in cadrul a 18 cicluri de rulare in decurs de 3 zile, utilizand un singur lat de calibrator si control,

3 loturi de reactivi, si 3 seturi de echipamente. Tabelele 11 si 12 rezuma precizia totala, i ntra-ciclu de rulare, si inter-ciclu de rulare, a operatorului, a

echipamentelor, si a lotului Analizei Progensa PCA3 pentru c/mL de analit si pentru Scorul PCA3.

Variabilitatile intra-ciclu de rulare, inter-operator, si inter-ciclu de rulare au contribuit cel mai mult, in ordine descrescatoare, la variabilitatea generala a

analizei. Lotul reactivilor si echipamentul au contribuit in mica masura la variabilitatea generala a analizei. Aceste rezultate demonstreaza faptul ca

Analizei Progensa PCA3 are un caracter de reproductibilitate, si ca principala sursa a variatiilor este aceea a erorilor aleatoare (intra-ciclu de rulare).

Tabelul 11: Reproductibilitatea Analizei Progensa PCA3: Analiza Copiilor/mL

Analit Component

Panel n c/mL

Masurat CV T otal

Intra-Ciclu

de rulare

Inter-Ciclu

de rulare

CV, Inter-

Operator

CV, Inter-

Echipament

CV, Inter-Lot

PCA3

248

27%

24%

15%

11%

7.021

11%

31.469

1.469

15%

13%

14.844

72.372

430

26%

11%

62.274

13%

PSA

52.739

218.789

10%

1.073.920

11%

37.185

386.504

10%

1.518.748

12%

11.007

14%

1.694.404

11%

Tabelul 12: Reproductibilitatea Analizei Progensa PCA3: Analiza Scorului PCA3

Component

Panel * n Scor Mediu

CV Total

CV Intra-

Ciclu de

rulare

CV Inter-

Ciclu de

rulare

CV, Inter-

Operator

CV, Inter-

Equipment

CV, Inter-

Lot

27%

26%

23%

14%

10%

12%

17%

28%

24%

11%

21%

14%

12%

*Componentele 4 pana la 6 ale panelului au continut numai transcript al ARN PCA3 sau PSA si astfel nu au fost incluse in aceasta analiza.

Bibliografie

Progensa PCA3

Progensa PCA3 Assay 20 501377RO Rev. 003

Bibliografie

1. Bussemakers, M.J.G., A. Van Bokhoven, G.W. Verhaegh, F.P. Smit, H.F.M. Karthaus, J.A. Schalken, F.M.J. Debruyne, N. Ru, and W.B.

Isaacs. 1999. DD3: A New Prostate-Specific Gene, Highly Overexpressed in Prostate Cancer. Cancer Res. 59:5975-5979.

2. Hessels, D., J.Mt. Klein Gunnewiek, I. van Oort, H.F.M. Karthaus, G.J.L. van Leenders, B. van Balken, L.A. Kiemeney, J.A. Witjes, and

J.A. Schalken. 2003. DD3PC A3-based Molecular Urine Analysis for the Diagnosis of Prostate Cancer. European Urology. 44:8-16.

3. Groskopf J., S.M. Aubin, I.L. Deras, A. Blase, S. Bodrug, C. Clark, S. Brentano, J. Mathis, J. Pham, T. Meyer, M. Cass, P. Hodge, M.L.

Macairan, L.S. Marks, and H. Rittenhouse. 2006. Aptima PCA3 Molecular Urine Test: Development of a Method to Aid in the Diagnosis of

Prostate Cancer. Clin Chem. 52:1089-95.

4. CLSI. 1995. CLSI document GP10-A, Assessment of the Clinical Accuracy of Laboratory Tests Using Receiver Operating Characteristic

(ROC) Plots. CLSI, Wayne, PA.

5. CLSI. 2004. CLSI document EP17-A, Protocols for Determination of Limits of Detectio n and Limits of Quantitation. CLSI, Wayne, PA.

6. CLSI. 2005. CLSI document EP7-A2, Interference Testing in Clinical Chemistry. CLSI, Wayne, PA.

7. CLSI. 2005. CLSI document EP15-A2, User Verification of Performance for Precision and Trueness. CLSI, Wayne, PA.

8. CLSI. 2003. CLSI document EP6-A, Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical Approach. CLSI,

Wayne, PA.

9. CLSI. 2004. CLSI document EP5-A2, Evaluatio n of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods. CLSI, Wayne, PA.

Hologic, Inc.

10210 Genetic Center Drive

San Diego

, CA 92121 SUA

Serviciu de asistenţă clienţi: +1 800 442 9892

customersupport@hologic.com

Asistenţă tehnică: +1 888 484 4747

molecularsupport@hologic.com

Pentru date de contact suplimentare, vizitaţi www.hologic.com.

Hologic, Aptima, DTS, Leader, Progensa, şi SB100 sunt mărci comerciale şi/sau mărci comerciale înregistrate ale Hologic, Inc. şi/sau subsidiarelor

acesteia, în Statele Unite ale Americii şi/sau alte ţări.

eppendorf (stylized) si REPEATER sunt marci comerciale apartinand Eppendorf AG.

RAININ este marca comerciala a Rainin Instrument, LLC.

TECAN si FREEDOM EVO sunt marci comerciale ale Tecan Group AG.

Toate celelalte mărci comerciale care ar putea apărea în acest prospect sunt deţinute de respectivii proprietari.

Este posibil ca acest produs să fie acoperit de unul sau mai multe brevete S.U.A. identificate la adresa www.ho logic.com/patents.

501377RO Rev. 003

2018-03

Hologic Progensa PCA3 Assay Instrucțiuni de utilizare

Marca: Hologic

Model: Progensa PCA3 Assay

Tip: Instrucțiuni de utilizare

Descărcați PDF

raport

Hologic Progensa PCA3 Assay Instrucțiuni de utilizare

Hologic Progensa PCA3 Assay Instrucțiuni de utilizare

Lucrări conexe

Alte documente