Hologic Progensa PCA3 Assay Instrucțiuni de utilizare

Marca
Hologic
Model
Progensa PCA3 Assay
Tip
Instrucțiuni de utilizare
Progensa PCA3
Progensa PCA3 Assay
Progensa PCA3 Assay 1 501377RO Rev. 003
Pentru utilizarea in diagnosticarea in vit ro.
Numai pentru export S.U.A.
Informatii Generale .......................................................................... 1
Reactivi si Materiale Furniz ate ....................................................... 2
Materiale ......................................................................................... 3
Atentionari si Masuri de Precautie ................................................ 3
Conditii de Pastrare si Manevrare ................................................. 4
Recoltarea, Transportul si Pastrarea Specimenelor ................... 5
Procedura de Testare ...................................................................... 6
Proceduri de Control de Calitate ................................................. 12
Interpretarea Rezultatelor ............................................................. 12
Limitari ....................................................................................... 15
Caracteristici de Performanta ...................................................... 16
Bibliografie ..................................................................................... 20
Informatii Generale
Destinatia Utilizarii
Analiza Progensa PCA3 este un test de amplificare a acidului nucleic
(NAAT) in vitro care detecteaza acidul ribonucleic al Cancerului de
Prostata Gena 3 (PCA3 (ARN) in specimenele de urina barbatesti
pentru a genera un Scor PCA3. Scorul PCA3 are drept scop utilizarea
in corelatie cu algoritmele de diagnostic standardizate in vederea
diagnosticarii cancerului de prostata.
Sumarul si Explicarea Testului
Utilizarea testului antigenului specific prostatei (PSA) din ser pentru
screening-ul cancerului de prostata a avut drept rezultat diagnosticul
biopsiei unor tumori (1) mai mici, nedetectate anterior, creand astlef o
noua dilema in diagnostic: Numai o parte din barbatii cu niveluri
crescute de PSA in ser au cancer de prostata detectabil. Barbatii cu
cel putin o biopsie negativa au adesea un nivel permanent de PSA
crescut in ser, in primul rand din cauza unor prostate marite si a
hiperplaziilor prostatice benigne (BPH). Totusi, un numar semnificativ
de barbati cu PSA usor crescut (2,5-4,0 µg/L) in ser, fie au deja, fie
vor dezvolta cancer de prostata semnificativ din punct de vedere clinic
(1). In timp ce biopsia ramane de referinta in detectarea cancerului de
prostata, sunt necesare totusi teste mai exacte cu o mai mare
specificitate pentru sprijinirea deciziilor de efectuarea a biosiei a
prostatei.
PCA3 (cunoscut de asemenea sub denumirea "PCA3DD3" sau
"DD3PCA3") este un ARN ne-codificat, specific prostatei, care este
supra-reprezentat in celulele cancerului de prostata, cu un nivel
median de 66 de ori mai mare decat cel din tesutul benign adiacent (2).
In contrast, expresia genei PSA este similara in celulele benigne ale
prostatei si in celulele canceroase; nivelurile ARN al PSA pot fi astfel
utilizate pentru a normaliza cantitatea de acid ribonucleic specific
prostatei (ARN) din probele de testare moleculare. A fost demonstrata
posibilitatea de realizare a testarii moleculare cantitative pe baza
PCA3 din sedimentele urinei (2) si din urina integrala (3).
In Analiza Progensa PCA3 se utilizeaza urina integrala reco ltata dupa
efectuarea unui tuseu rectal (DRE) co nstand in trei manopere de
palpare per lob. DRE elibereaza celule ale prostatei prin sistemul de
canale al prostatei in tractul urinar, unde celulele pot fi recoltate din
prima urina. Urina este procesata prin adaugarea Mediului de
Transport al Urinei (UTM), care lezeaza celulele si stabilizeaza ARN.
ARN ai PCA3 si PSA sunt cuantificati, si Scorul PCA3 este determinat
pe baza unui raport dintre ARN PCA3/PSA. In plus fata de
normalizarea semnalului PCA3, masurarea ARN PSA confirma de
asemenea existenta secventei ARN specific prostatei este suficienta
pentru a genera un rezultat valabil. Scorurile PCA3 mai ridicate sunt
corelate cu probabilitatea mai mare a unei biopsii pozitive a prostatei.
Principiile Procedurii
Analiza Progensa PCA3 consta in do ua teste cantitative de amplificare
a acidului nucleic. Progensa PCA3 Assay combina tehnologiile de
captare a tintei, de Amplificare prin Intermediul Transcrierii
(Transcription Mediated Amplification) (TMA), si Analiza pe Protectie a
Hibridizarii (Hybridization Protection Assay) (HPA) pentru a simplifica
operatiunile de procesare a specimenului de urina, de amplificare a
ARN al tintei, si respectiv de detectie a ampliconului.
Cand A naliza Progensa PCA3 este efectuata in laborator, moleculele
ARN al tinteti sunt izolate de specimenele de urina prin captarea tintei.
Oligonucleotidele ("oligonucleotidele de captare"), care sunt
complementare cu regiuni ale tintelor specifice secventei, sunt
hibridizate cu tintele din specimenul de urina. Oligonucleotide de
captare diferite sunt utilizate pentru fiecare tinta. Tinta hibridizata este
apoi capturata pe microparticule magnetice care sunt separate de
specimenul de urina intr-un camp magnetic. Etapele de spalare sunt
folosite pentru a indeparta componentele straine din tubul de reactie.
Etapele de separare magnetica si de spalare sunt efectuate cu un
sistem de captare a tintei.
Amplificarea tintei are loc prin TMA, care este o metoda pe baza de
transcriere de amplificare a acidului nucleic, care utilizeaza doua
enzime, transcriptaza inversa a virusului Moloney murine leukemia
(MMLV) si polimeraza T7 ARN. Un set unic de primeri este utilizat
pentru fiecare tinta. Transcriptaza inversa este utilizata pentru a
genera o copie a acidului deoxiribo nucleic (ADN) (continand o
secventa ce sprijina polimeraza T7 ARN) al secventei tintei.
Polimeraza T7 ARN produce copii multiple ale ampliconului ARN din
sablonul copiei ADN.
Detectia este realizata de HPA utilizand probe de acid nucleic simplu
spiralat cu etichete chemiluminescente care sunt complementare
ampliconului. Probe separate sunt utilizate pentru fiecare amplicon al
tintei. Probele de acid nucleic etichetate hibridizeaza in mod specific cu
ampliconul. Reactivul de Selectie face diferenta intre probele
hibridizate si cele nehibridizate prin inactivarea etichetei de pe probele
nehibridizate. In timpul etapei de detectie, semnalul chemiluminiscent
emis de proba hibridizata este masurat intr-un luminometru si este
raportat ca Unitati de Lumina Relativa (RLU).
ARNs ai PCA3 si PSA sunt cuantificati in tuburi separate si este
determinat Scorul PCA3. Calibratorii ce contin cantitati cunoscute de
transcript ARN PCA3 sau PSA sunt inclusi in fiecare ciclu de rulare al
analizei si utilizati pentru a genera o curba standard. Controalele PCA3
si PSA sunt de asemenea incluse pentru a verifica acuratetea
rezultatelor interpretate fata de curba standard.
Reactivi si Materiale Furnizate
Progensa PCA3
Progensa PCA3 Assay 2 501377RO Rev. 003
Reactivi si Materiale Furnizate
Notă: Pentru informaţii privind orice frază de pericol sau de precauţie
care ar putea fi asociată cu reactivii, consultaţi Safety Data Sheet
Library (Biblioteca pentru fişe cu date de securitate) la adresa
www.hologic.com/sds.
Reactivii si materialele furnizate in Kitul Progensa PCA3/PSA pentru
Analiza Progensa PCA3 sunt prezentate in lista de mai jos. Simbolurile
de Identificare a Reactivilor sunt de asemenea indicate langa numele
reactivului.
Kitul Analizei Progensa PCA3, 2 x 100 Reactii, Nr. de Cat. 302355
(8 cutii)
Kitul de Reactie Progensa PCA3 100
Cutie Refrigerata Progensa PCA3– Dupa receptie, se va pastra la
2°C pana la 8°C pana la data de expirare inscrisa pe eticheta
Simbol
Component
Cantitate
A
PCA3 Reactiv de Amplificare
Acizi nucleici neinfectiosi uscati in solutie
tamponata HEPES continand <10% agent de
expandare.
1 fiola
E
PCA3/PSA Reactivul Enzimei
Transcriptaza inversa si polimeraza ARN uscata in
solutie tamponata HEPES continand <10% agent
de expandare.
1 fiola
P
PCA3 Reactivul Probei
Probe ADN chemiluminescent neinfectios uscate in
succinat solutie tamponata continand <5% agent de
expandare si <5% litiu lauril sulfat.
1 fiola
Cutie la Temperatura Camerei Progensa PCA3 - Dupa receptie, se
va pastra la 15°C pana la 30°C pana la data de expirare inscrisa pe
eticheta
Simbol
Component
Cantitate
AR
Solutie de Reconstituire pentru Amplificarea PCA3
Solutie apoasa continand conservanti (<1%
parabeni).
1 X 9,3
mL
ER
Solutie de Reconstituire a Enzimei PCA3/PSA
Solutie tamponata HEPES continand un surfactant
(10% Triton X-100) si 20% glicerol.
1 X 3,3
mL
PR
Solutie de Reconstituire a Probei PCA3/PSA
Succinat solutie tamponata continand <5% litiu
lauril sulfat.
1 X 12,4
mL
S
Reactiv de Selectie PCA3/PSA
Solutie tamponata borat continand surfactant (1%
Triton X-100).
1 X 31
mL
TCR
Reactiv de Captare a Tintei PCA3
Acizi nucleici neinfectiosi in solutie tamponata
HEPES continand faza solida.
1 X 22
mL
Cartele de Sigilare
1 pachet
Capace de Reconstituire
1 pachet
Kit de Calibratori si Controale Progensa PC A3 - Dupa receptie, se
va pastra la 2°C pana la 8°C pana la data de expirare inscrisa pe
eticheta
Simbol
Component
Cantitate
CAL
Calibrator 1 PCA3
Solutie tamponata fosfat continand <5% litiu lauril
sulfat.
1 X 2,0
mL
CAL
Calibratori 2-5 PCA3
Acizi nucleici PCA3 neinfectiosi in solutie
tamponata fosfat continand <5% litiu lauril sulfat.
4 X 1,7
mL
PC
Controale Pozitive PCA3
Acizi nucleici PCA3 neinfectiosi in solutie
tamponata fosfat continand <5% litiu lauril sulfat.
2 X 1,7
mL
Fisa de Informare cu privire la Concentratia PCA3
1 fisa
Kit de Reactie Progensa PSA 100
Cutie Refrigerata Progensa PS A - Dupa receptie, se va pastra la
2°C pana la 8°C pana la data de expirare inscrisa pe eticheta
Simbol
Component
Cantitate
A
Reactiv de Amplificare PSA
Acizi nucleici neinfectiosi uscati in solutie
tamponata HEPES continand <10% agent de
expandare.
1 fiola
E
Reactivul Enzimei PCA3/PSA
Transcriptaza inversa si Polimeraza ARN uscate in
solutie tamponata HEPES continand <10% agent
de expandare.
1 fiola
P
Reactivul Probei PSA
Probe ADN neinfectioase chemiluminiscente
uscate in succinat solutie tamponata continand
<5% agent de expandare si <5% litiu lauril sulfat.
1 fiola
Cutie la Temperatura Camerei Progensa PSA - Pastrare la 15°C
pana la 30°C
Simbol
Component
Cantitate
AR
Solutie de Reconstituire pentru Amplificarea PSA
Solutie apoasa continand conservanti (<1%
parabeni).
1 X 9,3
mL
ER
Solutie de Reconstituire a Enzimei PCA3/PSA
Solutie tamponata HEPES continand un surfactant
(10% Triton X-100) si 20% glicerol.
1 X 3,3
mL
PR
Solutie de Reconstituire a Probei PCA3/PSA
Succinat solutie tamponata continand <5% litiu
lauril sulfat.
1 X 12,4
mL
S
Reactiv de Selectie PCA3/PSA
Solutie tamponata borat continand un surfactant
(1% Triton X-100).
1 X 31
mL
TCR
Reactiv de Captare a Tintei PSA Target
Acizi nucleici neinfectiosi in solutie tamponata
HEPES continand faza solida
1 X 22
mL
Cartele de sigilare
1 pachet
Capace de Reconstituire
1 pachet
Kit de Calibratori si Controale Progensa PS A - Dupa receptie, se
va pastra la 2°C pana la 8°C pana la data de expirare inscrisa pe
eticheta
Simbol
Component
Cantitate
CAL
Calibrator 1 PSA
Solutie tamponata fosfat continand <5% litiu lauril
sulfat.
1 X 2,0
mL
CAL
Calibratori 2-5 PSA
Acizi PSA nucleici neinfectiosi in fosfat solutie
tamponata continand <5% litiu lauril sulfat.
4 X 1,7
mL
PC
Controale Pozitive PSA
Acizi nucleici PSA neinfectiosi in solutie
tamponata fosfat continand <5% litiu lauril sulfat.
2 X 1,7
mL
Fisa de Informare cu privire la Concentratia PSA
1 fisa
Progensa PCA3
Atentionari si Masuri de Precautie
Progensa PCA3 Assay 3 501377RO Rev. 003
Lichide pentru Analiza Aptima - Dupa receptie, se vor pastra la
15°C pana la 30°C (2 cutii) pana la data de expirare inscrisa pe
eticheta
Simbol
Component
Cantitate
W
Solutie de Spalare
Solutie tamponata HEPES continand <2% sodiu
dodecil sulfat.
1 X 402
mL
DF
Tampon pentru Lichidul de Dezactivare
Solutie tamponata bicarbonat.
1 X 402
mL
O
Reactiv Ulei
Ulei silicon.
1 X 24,6
mL
Nota. Toate materialele incluse in Kitul Analizei Progensa PCA3 pot fi
achizitionate si separat (pentru detalii, co nsultati sectiunea Materiale).
Materiale
Notă: Pentru informaţii privind orice frază de pericol sau de precauţie
care ar putea fi asociată cu reactivii, consultaţi Safety Data Sheet
Library (Biblioteca pentru fişe cu date de securitate) la adresa
www.hologic.com/sds.
Nota. Materialele disponibile de la Gen-Probe au insc rise numere de
catalog.
Materiale Necesare dar Disponibile Separat
Cat. no.
Kit Progensa PCA3 de Transport al Specimenelor
de Urina 302352
Lumi nometru Leader HC+ 104747
Sistem GEN-PROBE de Captare a Tintei (TCS) 104555
Kit Aptima Auto Detect 301048
2 pipete eppendorf Repeater Plus multicanal 105725
Varfuri pentru pipeta multicanal (2,5 mL, 5,0 mL, 25,0 mL)
Fie:
2 agitatoare vortex multi-tub 102160F
3 Bai de apa circulanta (62°C ± 1°C,
42°C ± 1°C, 62°C ± 1°C) 104586F
3 Distantiere pentru baia de apa 104627
Fie:
2 SB100 Bai cu Incalzire Uscata /Vortexers 105524F
Instrumente SB100 suplimentare pot fi necesare
in functie de materialele utilizate)
Micropipeta, 1000 µL RAININ PR1000 901715
Varfuri, 1000 µL P1000 105049
Pipetor, eppendorf 20 pana la 200 µL 105726
Varfuri, Pipete 20 pana la 200 µL
Solutie cu clor de la 5% pana la 7% (0,7 M pana
la 1,0 M) solutie hipoclorit de sodiu
Recipient din plastic cu capac de diametru mare
Recipiente standard de recoltare a urinei , fara conservanti
Unitati de cate Zece Tuburi (TTU) TU0022
Casete cu cate Zece Varfuri (TTC) 104578
Standard de calibrare SysCheck 301078
Materiale Optionale
Kit de Reactie Progensa PCA3 100 302354
Kit de Reactie Progensa PSA 100 302357
Kit de Calibratori si Controale Progensa PCA3 302353
Kit de Calibratori si Controale Progensa PSA 302356
Paneluri Progensa PCA3/PSA pentru instruire 302350
Kit Progensa PCA3 pentru Diluarea Specimenelor 302351
Kit de Lichide pentru Analiza Aptima 302002C
Varfuri de unica folosinta cu filtru pentru pipete (1 mL) 10612513
(Tecan)
TECAN Freedom EVO 100/4 900932
Placa Suport pentru PCA3, DTS 800 902021
Rezervor pentru reactivi (un sfert de modul de 40 mL) 104765
Split reagent reservoir (sfert de modul 19 mL x 2) 901172
T uburi de transport 302521
Capace Inlocuitoare penetrabile 302520
Capace Inlocuitoare nepenetrabile 103036A
Atentionari si Masuri de Precautie
A. Pentru utilizare in diagnosticarea in vitro.
B. Numai pentru export S.U.A.
Atentionari pentru Laborator
C. Utilizati numai articolele de laborator de unica folosinta furnizate
sau mentio na te.
D. Respectati masurile de precautie de laborator obisnuite. Nu
mancati, nu beti si nu f umati in zonele destinate lucrului. Purtati
manusi de unica folosinta fara pudra, ochelari de protectie, si
halate de laborator atunci cand manipulati specimenele de urina
si reactivii din kit. Spalati-va temeinic pe maini dupa manipularea
specimenelor de urina si a reactivilor din kit.
E. Atentionare: Substa Iritante si Corozive: Evitati contactul
lichidelor Auto Detect 1 si Auto Detect 2 cu pielea, ochii si
membranele mucoase. In cazul in care aceste lichide intra in
contact cu pielea sau ochii, spalati cu apa zona afectata. In cazul
in care aceste lichide se varsa, diluati substanta varsata cu apa
inainte de a o sterge.
F. Suprafetele de lucru, pipetele, si alte echipamente trebuie
decontaminate in mod regulat cu hipoclorit de sodiu solutie de
2,5% pana la 3,5% (0,35M pana la 0,5M) (a se vedea sectiunea
Note Procedurale).
G. Se recomanda existenta unei zone separate pentru post-
amplificare pentru a minimiza riscul de contaminare cu amplicon
in timpul analizei. Aceasta zona trebuie sa fie la distanta de zona
de pre-amplificare, unde se desfasoara pregatirea reactivilor,
captarea tintei, si amplificare.
H. Pentru a ajuta in prevenirea contaminarii cu amplico n a zo nelor
din laborator, spatiul laboratorului trebuie amenajat astfel incat sa
existe un flux de lucru unidirectional de la prepararea reactivului
pana la post-amplificare. Specimenele, echipamentele, si reactivii
Conditii de Pastrare si Manevrare
Progensa PCA3
Progensa PCA3 Assay 4 501377RO Rev. 003
nu treb uie readusi i n zo na in care s-a efectuat o etapa anterioara.
Personalul din laborator nu trebuie sa treaca inapoi in zonele de
lucru anterioare fara a respecta masuri adecvate de precautie
impotriva contaminarii.
Atentionari cu privire la Specimene
I. Dupa adaugarea urinei, nivelul de lichid din tubul de transport al
specimenelor de urina trebuie sa se inscrie intre cele doua linii
negre indicatoare de pe eticheta tubului. In caz contrar,
specimenul trebuie refuzat.
J. Respectati conditiile corespunzatoare de pastrare in timpul
transport ului specimenelor pentru a asigura integritatea acestora.
Nu a fost evaluata stabilitatea specimenelor in cazul transportului
in conditii diferite de cele recomandate.
K. Datele de expirare inscrise pe kiturile de recoltare se refera la
locul reco ltarii si nu la unitatea de testare. Specimenele recoltate
in orice moment inaintea datei de expirare a kitului de recoltare,
care sunt transportate si pastrate in conformitate cu specificatiile
din insertul tehnic, sunt valabile pentru testare chiar daca data de
expirare a tubului de reco ltare a trecut.
L. Pastrati toate specimenele la temperaturile specificate.
Performanta analizei poate fi influentata de utilizarea
specimenelor pastrate in mod necorespunzator. Pentru
instructiuni specifice, consultati Reco ltarea, Transportul si
Pastrarea Specimenelor.
M. Specimenele de urina pot fi infectioase. Respectati Masurile de
Precautie Universale atunci cand efectuati aceasta analiza.
Metodele adecvate de manipulare si indepartare a produselor
trebuie stabilite de catre directorul laboratorului. Numai personalul
calificat in utilizarea Analizei Progensa PCA3 si instruit in mod
adecvat cu privire la manipularea materialelor infectioase ar trebui
sa efectueze aceasta procedura.
N. Evitati contaminarea incrucisata in timpul etapelor de manipulare
a specimenului. Specimenele de urina pot co nti ne nive luri
crescute de ARN al tintei. Asigurati-va de faptul ca recipientele cu
specimene nu intra in contact unele cu altele, si indepartati
materialele folosite fara a le trece peste recipeintii neacoperiti.
Schi mbati-va manusile daca acestea intra in contact cu
specimenele, pentru a evita contaminarea incrucisata.
Atentionari cu privire la Analiza
O. Nu utilizati kitul dupa data de expirare a acestuia.
P. Pentru Kit-ul de testare Progensa PCA3, nu schimbaţi între ei,
nu amestecaţi şi nu combinaţi reactivii de test PCA3 din
loturi cu numere diferite (adică, pentru fiecare analit, reactivii de
test din cutia „refrigerată” şi din cea „la temperatura camerei”
trebuie să provină din acelaşi lot). Reactivii de test pot fi utilizaţi
împreună cu calibratori şi kit‑uri de control din diferite loturi . Kit-
urile Aptima Assay Fluids sunt interşanjabile. Kit-urile de reactivi
PCA3 şi PSA nu trebuie să fie din acelaşi lot.
Q. Pastrati toti reactivii analizei la temperaturile specificate.
Performanta analizei poate fi influentata de utilizarea reactivilor
analizei pastrati in mod necorespunzator. Pentru instructiuni
specifice, consultati sectiunile Conditii de Pastrare si Manipulare
si Note Procedurale.
R. Pentru dezactivarea analizei (a se vedea Procedura de Testare),
concentratia minima de solutie de hipoclorit de sodiu trebuie sa fie
de 2,5% (0,35 M) dupa diluarea 1:1 cu tampon de dezactivare.
Astfel, solutia de hipoclorit de sodiu initiala trebuie sa fie de 5%
pana la 7% (0,7 M pana la 1,0 M) pentru a atinge co ncentratia
finala necesara dezactivarii.
S. Trebuie sa utilizati varfuri cu filtru hidrofob. Un numar de minim
doua pipete multicanal trebuie alocate in utilizarea acestei
analize: una pentru utilizarea in etapele de pre-amplificare si una
pentru utilizarea in cadrul etapelor post-amplificare. O micropipeta
trebuie alocata utilizarii in transferul specimenului, cu exceptia
cazului in care se foloseste un instrument TECAN Freedom EVO
100/4. Toate dispozitivele de pipetare trebuie curatate cu
regularitate co nform celor descrise in sectiunea Note Procedurale.
T. Cand folositi pipete multicanal pentru adaugarea reactivului, nu
atingeti tubul de reactie cu varful pipetei pentru a preveni
contaminarea de la un tub la altul.
U. Omogenizarea corespunzatoare este necesara pentru a obtine
rezultatele exacte ale testului. Pentru detalii complete, consultati
sectiunea Note Procedurale.
V. Bai de apa separate trebuie alocate pentru etapele de pre-
amplificare, amplificare, si post-amplificare ale analizei.
W. Unii reactivi ai acestui kit au inscrise pe etichete simbolurile de
riss si siguranta conform Directivei Europene 1999/45/EC si
trebuie manipulati in consecinta. Fisele Datelor de Securitate ale
Materialelor pot fi vizualizate pe www.gen-probe.com si sunt
disponibile la cerere.
Conditii de Pastrare si Manevrare
A. Pentru informatii cu privire la pastrarea reactivilor, consultati
sectiunea Pastrarea Reactivilor.
Tabelul 1: Pastrarea Reactivilor
Reactiv/Lich
id Pastrarea in cazul
nedesigilarii
de expirare) in cazul
Reactivii de
Amplificare
2°C pana la 8°C pana la
data de expirare
Reactivii Probei
2°C pana la 8°C pana la
data de expirare
Reactivul Enzimei
2°C pana la 8°C pana la
data de expirare
Reactivii de
Captare a Tintei
15°C pana la 30°C pana
la data de expirare
Solutia de
R
econstituire
pentru Amplificare
2°C pana la 30°C pana
la data de expirare N/A (unica folosinta)
Solutia de
Reconstituire a
Probei
2°C pana la 30°C pana
la data de expirare N/A (unica folosinta)
Solutia de
Reconstituire a
Enz imei
2°C pana la 30°C pana
la data de expirare N/A (unica folosinta)
Reactivul de
Selectie
2°C pana la 30°C pana
la data de expirare
Calibratorii
2°C pana la 8°C pana la
data de expirare
Controalele
2°C pana la 8°C pana la
data de expirare
Reactivul Ulei
15°C pana la 30°C pana
la data de expirare
Solutia de Spalare
15°C pana la 30°C pana
la data de expirare
Tamponul pentru
Lichidul de
Dezactivare
15°C pana la 30°C pana
la data de expirare
28 de zile la 15°C pana la
30°C
* Pot fi reutilizate pana la 4 ori pentru alte cicluri de rulare, cu conditia
ca timpul total de ramanere la temperatura camerei sa nu fie mai mare
de 24 ore.
Progensa PCA3
Recoltarea, Transportul si Pastrarea Specimenelor
Progensa PCA3 Assay 5 501377RO Rev. 003
B. Nu pastrati Reactivul de Captare a Tintei la temperaturi sub
15°C.
C. Reactivul Probei si Reactivul Probei Reconstituite sunt
fotosensibile. Protejati reactivii de expunerea prelungita la lumina
in timpul pastrarii si pregatirii in vederea utilizarii.
D. Nu congelati reactivii.
E. Nu utilizati reactivii sau lichidele dupa data de expirare.
F. Calibratorii si Controalele Progensa PCA3 si PSA sunt fiole cu
utilizare in cadrul unui singur ciclu de rulare si trebuie aruncati
dupa folosire.
G. Modificarile in aspectul fizic al reactivului furnizat poate indica
instabilitatea sau deteriorarea acestor materiale. Daca
schimbarile aspectului fizic al reactivilor sunt observate dupa
resuspendare (de exemplu, modificarea evidenta a culorii
reactivului sau aspectul tulbure indica o contaminare microbiana),
contactati Departamentul de Suport Tehnic al Gen-Probe inainte
de utilizare.
H. Aruncati reactivul reconstituit dupa 30 de zile sau la data de
expirare, oricare dintre aceste cazuri intervine primul.
I. Resturile de reactivi desigilati sau reconstituiti pot fi utilizati in
analizele ulterioare daca au fost pastrate corespunzator dupa
utilizarea initiala. Reactivul ramas poate face parte dintr-o proba
de tip pool in combinatie cu alt reactiv proaspat sau cu alt rest de
reactiv apartinand aceluiasi lot. Nu schimbati intre ei, nu
amestecati si nu combinati reactivi din kituri avad numere de
lor diferite (vezi atentionari si masuri de precautie). Nici o
componenta a reactivului de tip pool nu trebuie sa depaseasca
limitele de pastrare a reactivilor desigilati sau reconstituiti.
Asigurati-va de faptul ca reactivul de tip pool a fost omogenizat in
totalitate si ca a fost pregatit un volum suficient pentru a furniza
destul reactiv pentru un ciclu de complet de rulare.
Recoltarea, Transportul si Pastrarea
Specimenelor
Analiza Progensa PCA3 este conceputa pentru a cuantifica ARN
PCA3 si PSA din prima urina recoltata dupa efectuarea tuseului reactal
(DRE) constand in trei manopere de palpare per lob. Urina este
procesata utilizand Kitul Progensa PCA3 de Transport al Specimenelor
de Urina. Stabilitatea ARN PCA3 si PSA in urina si in urina procesata a
fost stabilita prin mo nitorizarea nivelurilor de copiere a ARN in
specimenele de urina recoltate conform instructiunilor de mai jos.
A. Instructiuni pentru recoltarea si procesarea probei de urina:
1. Poate fi de ajutor sa ii solicitati pacientului sa consume un
volum mare de apa (aproximativ 500 mL) pentru a asigura o
cantitate suficienta de urina pentru recoltare.
2. Inaintea recoltarii specimenului de urina, efectuati un tuseu
rectal conform celor descrise mai jos:
Aplicati presiune asupra prostatei, astfel incat sa reduceti
suprafata cu aproximativ 1 cm, de la baza catre apex si din
lateral catre linia mediana pentru fiecare lob conform celor
indicate in figura de mai jos. Efectuati exact trei manopere
de palpare pentru fiecare lob. Aceasta procedura nu are
drept scop masajul prostatei.
Figura 1. Directia Corespunzatoare de Aplicare a Presiunii asupra
Prostatei
3. Dupa tuseul rectal, solicitati pacientului sa furnizeze o
cantitate de specimen din prima urina (aproximativ 20 pana
la 30 mL din primul jet de urina) intr-un recipient de recoltare
al urinei etichetat corespunzator. Aceasta trebuie sa fie
prima proba de urina dupa tuseul rectal. Utilizati un recipient
de recoltare fara conservanti. In cazul in care pacientul nu
poate opri jetul de urina si furnizeaza o cantitate mai mare
decat cea solicitata de 20 pana la 30 mL, pastrati intregul
volum. Daca pacientul nu poate furniza cantitatea solicitata,
cantitatea minima necesara pentru a rula Analiza Progensa
PCA3 este de cel putin 2,5 mL. In caz contrar, specimenul
trebuie respins.
Nota. Volumele foarte mari de urina pot scadea concentratiile
analitului PCA3 si PSA, si cateodata pot avea drept urmare un
specimen invalid. Astfel, pacientul trebuie sa incerce sa evite
umplerea recipientului de recoltare a urinei.
4. Specimenele de urina neprocesate, in cazul in care
acestea nu sunt procesate imediat, trebuie pastrate la
2°C pana la 8°C sau pastrate la gheata. Specimenele de
urina neprocesate, pastrate la rece, trebuie sa fie
transferate intr-un tub de transport al specimenului de
urina in decurs de 4 ore de la recoltare. In caz contrar,
specimenul trebuie respins si trebuie recoltat un nou
specimen. Nu congelati specimenele de urina
neprocesate.
5. Pentru a procesa specimenele de urina, pozitionati ermetic
capacul si intoarceti specimenul de urina cu susul in jos de 5
ori pentru a resuspenda celulele. Inlaturati capacul tubului de
transport al specimenelor de urina si transferati o cantitate
de 2,5 mL din urina reco ltata in tub utilizand pipeta de
transfer de unica folosinta furnizata. A fost adaugata o
cantitate corecta de urina atunci cand nivelul lichidului se
situeaza intre liniile negre de marcaj de pe eticheta tubului
transport al specimenelor de urina.
6. Repuneti etans capacul tubului de transport al specimenelor
de urina si intoarceti tubul cu susul in jos de 5 ori pentru
omogenizare. Acest specimen reprezinta acum specimenul
de urina procesat.
B. Transportul si pastrarea specimenelor inainte de testare:
1. Specimenele de urina procesate trebuie transportate catre
laborator in tubul de transport al specimenelor de urina.
Acestea trebuie expediate in conditii normale (fara control de
temperatura) sau congelate. Programati transportul astfel
incat sa va asigurati de faptul ca specimenele de urina
procesate sunt receptionate de catre locatia de testare in
decurs de 5 zile de la recoltare. Dupa receptionarea
transport ului, laboratorul trebuie sa verifice data recoltarii
specimenului de pe tub. Daca specimenele au fost expediate
in conditii normale si sunt receptionate la mai mult de 5 zile
Procedura de Testare
Progensa PCA3
Progensa PCA3 Assay 6 501377RO Rev. 003
dupa recoltarea specimenului, specimenul trebuie respins si
trebuie emisa o cerere pentru un nou specimen. Laboratorul
poate pastra specimenele la 2°C pana la 8°C timp de pana
la 14 zile, dupa care specimenele trebuie aruncate. Daca
este necesara pastrarea pentru perioade mai indelungate,
consultati Tabelul 2 pentru a identifica perioadele de
pastrare permise la diferite temperaturi.
Tabelul 2: Durata de Pastrare a Specimenelor de Urina Procesate
Temperatura de Pastrare
Perioada
Transportul si pastrarea specimenelor procesate
Pana la 5 zile*
Dupa receptionarea de catre locatia de testare
2°C pana la 8°C
Pana la 14 zile
-35°C pana la -15°C
Pana la 11 luni**
-65°C sau la temperaturi mai scazute
Pana la 36 luni**
*Perioada de transport permisa i n co nditii normale sau congelate.
**Perioada permisa dupa pastrarea in frigider
2. Specimenele de urina procesate pot fi supuse la maxim cinci
cicluri de congelare-dezghetare.
C. Pastrarea specimenului dupa testare:
1. Specimenele care au fost testate trebuie pastrate in pozitie
vericala intr-un suport.
2. Daca nu au fost reacoperite cu capace intacte, tuburile de
transport al specimenelor de urina trebuie acoperite cu un
plastic nou curat sau cu o folie protectoare.
3. Daca specimenele testate trebuie congelate sau trasnportate,
indepartati capacele penetrabile si puneti alte capace noi,
nepenetrabile, pe tuburile de transport al specimenelor de
urina. Daca specimenele trebuie transportate catre alta
unitate in vederea testarii, temperaturile recomandate
trebuie respectate. Evitati improscarea si contaminarea
incrucisata.
Nota. Specimenele trebuie expediate in conformitate cu
reglementarile natio nale si internationale de transport
aplicabile.
Procedura de Testare
A. Pregatirea Zonei de Lucru
1. Reglati una dintre baile de apa la 62°C ± 1°C pentru pre-
amplificare, si a doua baie de apa la 42°C ± 1°C pentru
amplificare, si o a treia baie de apa to 62°C ± 1°C for post-
amplificare. Asigurati-va de faptul ca baile de apa contin
suficienta apa (a se vedea sectiunea Note Procedurale).
Daca utilizati Baia de Incalzire Uscata / Vortexer SB100,
consultati Fisa de Utilizare a Baii de Incalzire Uscata /
Vortexer SB100 pentru Analiza Progensa PCA3 Assay (fisa
de utilizare a SB100).
2. Inainte de a incepe testarea, stergeti suprafetele de lucru si
pipetele cu solutie de hipoclorit de sodiu de 2,5% pana la
3,5% (0,35M pana la 0,5M). Lasati solutia de hipoclorit de
sodiu sa intre in contact cu suprafetele si pipetoarele timp de
cel putin 1 minut, iar apoi clatiti cu apa. Nu lasati solutia de
hipoclorit de sodiu sa se usuce. Acoperiti suprafata mesei de
lucru pe care veti efectua analiza cu o husa de laborator
absorbanta curata dublata pe partea opusa cu plastic.
B. Place Asezati un numar suficient de Casete a cate Zece Varfuri in
Sistemul de Captare a Tintei (TCS). Asigurati-va de faptul ca
flaconul de spalare al TCS este umplut cu Solutie de Spalare si
ca aspiratorul este conectat la pompa vacuum. (Consultati
Manualul Operatorului Sistemului de Captare a Tintei).
C. Reconstituirea si Prepararea Reactivului
Reconstituirea reactivului trebuie efectuata inainte de a incepe
procedura de transfer al specimenului.
1. Pentru a reconstitui Reactivul de Amplificare, al Enzimei, si
al Probei, combinati flacoanele de reactiv liofilizat cu solutia
de reconstituire. In cazul in care a fost tinuta la rece, lasati
Solutia de Reconstituire sa ajunga la la temperatura camerei
inainte de utilizare.
Figura 2. Procesul de Reconstituire
a. Imperecheati solutia de reconstituire corespunzatoare
cu reactivul uscat. Verificati ca fiolele sa aiba etichete
de aceeasi culoare pentru a va asigura de
imperecherea corecta.
b. Deschideti flaconul cu reactivul uscat si introduceti cu
fermitate capatul crestat al capacului de reconstituire in
deschiderea fiolei (Figura 2, Pasul 1).
c. Deschideti solutia de reconstituire cu eticheta de
aceeasi culoare, si asezati capacul pe o suprafata de
lucru curata si acoperita. in timp ce mentineti sticluta cu
solutie pe masa de lucru, introduceti cu fermitate in
deschizatura sticlutei celalalt capat al capacului de
reco nstit uire (Figura 2, Pasul 2).
d. Inoarceti usor ansamblul de sticlute. Permiteti solutiei
sa se scurga din sticluta in fiola de sticla (Figura 2,
Pasul 3). Asteptati ca reactivul liofilizat sa se
reconstituie solutie, apoi rotiti usor solutia din fiola de
sticla pentru omogenizare. Evitati formarea spumei in
timpul amestecarii (Figura 2, Pasul 4).
e. Intoarceti ansamblul si inclinati-il intr-un unghi de 45°
pentru a minimiza crearea spumei (Figura 2, Pasul 5).
Permiteti intregului lichid sa se scurga inapoi in flaconul
de plastic.
f. Indepartati capacul de reco nstituire si fiola de sticla
(Figura 2, Pasul 6).
g. Repuneti capacul flaconului de plastic (Figura 2, Pasul
7). Inregistrati initialele operatorului si data reco nstituirii,
pe toate fiolele de reactivi reconstituiti. Asigurati-va ca
ati notat analitul (PCA3 sau PSA) pe fiolele
Reactivulului Probei.
h. Aruncati capacul de reconstituire si fiola de sticla
(Figura 2, Pasul 8).
Progensa PCA3
Procedura de Testare
Progensa PCA3 Assay 7 501377RO Rev. 003
2. Reactivii Probei, de Amplificare si al Enzimei reconstituiti
anterior trebuie sa ajunga la temperatura camerei (15°C
pana la 30°C) inainte de a incepe testarea. Co nsultati
sectiunea Conditii de Pastrare si Manipulare in cazul in care
doriti sa obtineti reactivi de tip pool din resturi de reactivi.
Daca Reactivul de Amplificare reconstituit contine precipitat
care nu reconstituie solutie la temperatura camerei, incalziti
la 62°C ± 1°C timp de 1 pana la 2 minute in zona de pre-
amplificare. Daca Reactivul Probei reconstituit contine
precipitat care nu reconstituie solutie la temperatura
camerei, incalziti la 62°C ± 1°C timp de 1 pana la 2 minute in
zona de post-amplificare. Dupa aceste etape de incalzire,
reactivii reconstituiti pot fi utilizati chiar daca precipitatul
rezidual persista. Dupa resuspendare, omogenizati
continutul fiolelor prin intoarcerea usoara a acestora.
D. Organizarea Suportului
Pipeta multicanal utilizata in operatiunile de captare a tintei, de
transfer al specimenului si de amplificare a acestuia trebuie
alocata numai in scopul efectuarii acestor etape (a se vedea
Atentionari si Masuri de Precautie
).
1. Organizati un suport pentru analitul PCA3 si alt suport pentru
analitul PSA.
Nota. Daca numarul specimenelor este destul de redus,
ambii analiti pot fi testati intr-un singur suport. Daca utilizati
instrumentul TECAN Freedom EVO 100/4, trebuie pastrate
suporturi separate pentru fiecare dintre analiti. Nu pot fi
testate mai mut de doua suporturi (20 TTU-uri) pline in
acelasi timp.
2. In suportul(rile) de Unitati de Zece Tuburi (TTU), puneti
destule TTU-uri pentru a aseza calibratorii, controalele, si
specimenele pentru fiecare analit.
3. Aplicati pe TTU-uri etichete cu datele de identificare ale
probelor/specimenelor. Tabelul 3 descrie adaugarea
calibratorilor, controalelor, si a specimenelor. Incepeti
calibratorii PSA pe un TTU nou.
Nota. Calibratorii vor fi rulati in trei replicate, iar controalelel
in doua replicate fiecare, si trebuie rulate pe acelasi suport
cu specimenele. Specimenele trebuie rulate in duplicat. Nu
lasati tuburi de reactie goale intre calibratori, controale, si
specimene. Daca utilizati instrumentul TECAN Freedom
EVO 100/4, co nsultati Fisa de Utilizare a inst rument ului
TECAN Freedom EVO 100/4 pentru Analiza Progensa PCA3
(fisa de utilizare a TECAN Freedom EVO) pentru mai multe
ins tructiuni.
Tabelul 3: Examplu de Organizare a Suportului
Po
zitia
Suportului
Descrierea
Probei
*Concentratia
PCA3 a T intei
(c/mL)
* Concentratia
PSA a Tintei
(c/mL)
1 pana la 3
Calibrator 1
0
0
4 pana la 6
Calibrator 2
250
7.500
7 pana la 9
Calibrator 3
2.500
75.000
10 pana la 12
Calibrator 4
25.000
750.000
13 pana la 15
Calibrator 5
125.000
3.000.000
16 pana la 17
Contro l A
1.250
37.500
18 pana la 19
Contro l B
62.500
1.500.000
20 pana la n
Specimen
necunoscut
necunoscut
*Calibratorii si Controalele Pozitive PCA3 si PSA au valori atribuite,
astfel incat valorile c/mL reale pentru Calibratorii 2 pana la 5 si
Controalele A si B vor fi usor diferite fata de concentratiile tintei
inregistrate in tabel, si vor varia de la un lot la altul. Informatia cu
privire la concentratii este f urniz ata pe un card din pachetul de fiole ale
calibratorilor si ale controalelor si este utilizata pentru calibrarea si
determinarea valabilitatii ciclului de rulare.
E. Verificarea Informatiilor cu privire la Concentratii
Verificati impreuna cu administratorul de sistem al Programului
Analizei Progensa PCA3 pentru a va asigura ca informatiile
despre co ncentratia pentru loturile Kiturilor de Calibratori si
Controale Progensa ale PCA3 si PSA testate au fost introduse.
Pentru mai multe informatii, consultati Quick Reference Guide
pentru Analiza Progensa PCA3 (Ghid Rapid de Referinta) sau
Manualul Administratorului de Sistem al Programului Analizei
Progensa PCA3.
Nota. Introducerea informatiilor cu privire la concentratie este
necesara inainte de prima utilizare a fiecarui lot nou de kituri de
calibratori si controale. Rularile ulterioare utilizand calibratorii si
controalele din acelasi lot de kituri nu necesita alte operatiuni.
F. Organizarea Editorului Listei de Lucru
Generati o lista de lucru pentru rularea analizei utlizand Editorul
GEN-PROBE al Listei de Lucru pe un computer aflat in zona de
pre-amplificare. Pentru a utiliza Editorul Listei de Lucru, consultati
Ghidul Rapid de Referinta sa u Manualul de Operare pentru
Editorul Listei de Lucru GEN-PROBE. Daca utilizati instrumentul
TECAN Freedom EVO 100/4, consultati de asemenea fisa de
utilizare TECAN Freedom EVO pentru mai multe instructiuni.
G. Pregatirea probei
1. Lasati calibratorii si controalele sa ajunga la temperatura
camerei inainte de testare. Omogenizati continutul fiolelor
prin usoara intoarcere a acestora.
2. Lasati specimenele sa ajunga la temperatura camerei inainte
de testare. Nu agitati specimenele cu ajutorul vortexului.
Specimenele trebuie omogenizate prin intorcere usoara,
ocazionala, in timpul perioadei de incalzire. Pentru informatii
cu privire la precipitat si reconstituirea solutie si despre
manipularea specimenelor congelate, consultati sectiunea
Note Procedurale.
Procedura de Testare
Progensa PCA3
Progensa PCA3 Assay 8 501377RO Rev. 003
H. Pre-amplificarea
Temperatura ambientata in timpul procesului de pre-amplificare
trebuie sa fie de 15°C pana la 30°C. Rulati ambele suporturi in
paralel. Daca utilizati o Baie de Incalzire Uscata/Vortexer SB100,
consultati fisa de utilizare a SB100. Daca utilizati un instrument
TECAN Freedom EVO 100/4, consultati fisa de utilizare TECAN
Freedom EVO pentru mai multe instructi uni.
1. Omogenizati in totalitate Reactivul de Captare a Tintei (TCR)
prin rotire sau intoarcere. Utilizand pipeta multicanal,
adaugati 100 µL al TCR specific analitului in tubul de reactie
corespunzator.
2. Intepati capacul fiolei Calibratorului cu ajutoril
micropipetorului si adaugati 400 µL de Calibrator in tubul de
reactie etichetat corespunzator. Utilizand acelasi varf de
pipeta, extrageti replicate suplimentare din fiola prin capacul
intepat. Utilizati varfuri noi de pipete pentru fiecare fiola de
Calibrator. Repetati procedura pentru adaugarea
Controalelor si specimenelor. Acoperiti si pastrati proce rest
de specimen si pastrati la temperaturi de 8°C sau mai
scazute (a se vedea Recoltarea, Transportul si Pastrarea
Specimenelor pentru mai multe informatii) pentru cazul in
care este necesara retestarea.
3. Acoperiti TTU-urile cu cardul(rile) de sigilare si agitati usor
suportul cu mana. Nu agitati cu ajutorul vortexului.
Incubati suportul la 62°C ± 1°C intr-o baie de apa timp de 30
± 5 minute.
4. Scoateti suportul din baia de apa si stergeti partea inferioara
a tuburilor cu un material absorbant.
5. Asigurati-va de faptul ca toate cartele de sigilare sunt in
pozitie. Daca este neces, inlocuiti-le cu noi cartele de sigilare
si sigilati ferm TTU-uri le.
6. Agitati suportul timp de 60 de secunde cu ajutorul
agitatorului vortex multi-tub (a se vedea sectiunea Note
Procedurale). Incepeti operatiunea de agitare in decurs de 2
minute de la scoaterea suportului din baia de apa.
7. Fara a inlatura cartelele de sigilare, incubati suportul la
temperatura camerei timp de 30 ± 5 minute.
8. Asezati suportul cu capatul Frontal inainte pe baza
magnetica a TCS timp de 5 pana la 10 minute. Incarcati
suportul TTC cu TTC-uri.
9. Incarcati liniile pompei statiei de distributie prin pomparea
Solutiei de Spalare prin tuburile de distributie. . Pompati
suficient lichid in sistem astfel incat sa nu existe bule de aer
pe linie si astfel incat lichidul sa curga constant prin toate
cele 10 duze.
10. Porniti pompa vacuum si deconectati tubul aspiratorului de la
primul conector dintre aspirator si recipientul de condensare.
Asigurati-va de faptul ca masura standard a vacuumului
respecta specificatiile testului de scurgere. Poate dura 15
secunde pentru a realiza aceasta citire. Reconectati tubul, si
asigurati-va de faptul ca masura standard a vacuumului
respecta specificatiile nivelului de vacuum. Lasati pompa
vacuum pornita pana cand pasii de captare a tintei sunt
finalizati si tubulatura de aspirare este uscata.
Pentru mai multe informatii consultati Fisa de Specificatii a
Vacuumului Sistemului de Captare a Tintei care se
regaseste la sfarsitul Manualului Operatorului Sistemului de
Captare a Tintei sau contactati Departamentul de Suport
Tehnic al Gen-Probe.
11. Ataşaţi în mod ferm racordul de aspirare la primul set de
vârfuri. Coborâţi vârfurile în primul TTU până când vârfurile
intră în contact cu suprafaţa lichidului. Menţineţi contactul
vârfurilor cu suprafaţa lichidului pe măsură ce vârfurile se
deplasează în jos, până când acestea intră în contact cu
partea de jos a tuburilor. Loviţi încet vârfurile de partea de
jos a tuburilor până când întreaga cantitate de lichid rămasă
este îndepărtată. Nu ţineţi vârfurile în co ntact prelungit cu
partea de jos a tuburilor şi nu loviţi vârfurile prea rapid,
pentru a evita formarea de spumă în exces în rezervorul cu
vacuum.
12. Dupa ce actiunea de aspirare a fost finalizata, expulzati
varfurile in cutia initiala a acestora. Repetati pasii de aspirare
pentru TTU-urile ramase, utilizand un varf distinct pentru
fiecare tub de reactie.
13. Pozitionati tubul de distributie pe deasupra fiecarui TTU si,
utilizand pompa statiei de distributie, picurati 1,0 mL de
Solutie de Spalare in fiecare tub al TTU-ului.
14. Acoperiti tuburile cu o cartela de sigilare si luati suportul de
pe TCS. Agitati o data pe agitatorul vortex multi-tub. Pentru
mai multe informatii consultati sectiunea Note Procedurale.
15. Asezati suportul pe baza magnetica a TCS timp de 5 pana la
10 minute.
16. Aspirati tot lichidul conform Pasilor 11 si 12.
17. Dupa efectuarea ultimei aspirari, luati suportul din baza TCS
si verificati vizual tuburile pentru a va asigura ca intreg
lichidul a fost aspirat, si toate tuburile contin granule de
particule magnetice. Daca mai exista lichid, reasezati
suportul pe baza TCS pentru 2 minute, si repetati aspirartia
pentru acel TTU utilizand aceleasi varfuri folosite anterior
pentru fiecare tub de reactie. Daca VREO granula de
particula magnetica este vizibila dupa ce operatiunea de
aspirare este completa, tubul poate fi acceptat. Daca nici o
granula nu este vizibila, specimenul trebuie retestat. Daca
acelasi specimen nu contine nici o granula de particule
magnetice intr-un ciclu de rulare ulterior, acest lucru poate
indica o problema legata de specimen. In aceasta situatie,
se recomanda o noua recoltare a unui specimen de urina.
I. Amplificarea
Nota. Adaugarea Enzimei intr-un suport de reactie (Pasii 6 si
7 de mai jos) trebuie efectuata in 90 de secunde sau mai
putin.
Efectuati Pasii 6 si 7 pe un singur suport inainte de repetare pe
cel de-al doilea. Daca utilizati a Baie de Apa/Vortexer SB100,
consultati fisa de utilizare a SB100. Daca utilizati instrumentul
TECAN Freedom EVO 100/4, consultati fisa de utilizare a TECAN
Freedom EVO pentru mai multe informatii.
1. Utilizand o pipeta multicanal, adaugati 75 µL de Reactiv de
Amplificare reconstituit specific fiecarui analit in fiecare tub
de reactie. Toate amestecurile de reactie din suport trebuie
sa fie de culoare rosie.
2. Utilizand o pipeta multicanal, adaugati 200 µL de Reactiv
Ulei.
3. Acoperiti tuburile cu cartele de sigilare si agitati cu ajutorul
agitatorului vortex multi-tub.
4. Incubati suportul in baia de apa pre-amp la 62°C ± 1°C timp
de 10 ± 5 minute.
5. Transferati suportul intr-o baie de apa la 42°C ± 1°C timp de
5 ± 2 minute.
Progensa PCA3
Note Procedurale
Progensa PCA3 Assay 9 501377RO Rev. 003
6. Mentinand suportul in baia de apa, inlaturati cu atentie
cardul de sigilare si, utilizand o pipeta multicanal, adaugati
25 µL din Reactivul Enzimei reconstituit in fiecare dintre
amestecurile de reactie. Toate reactiile trebuie sa fie acum
de culoare portocalie.
7. Acoperiti imediat tuburile cu o noua cartele de sigilare,
scoateti suportul din baia de apa, si omogenizati repede
reactiile prin agitarea usoara cu mana.
Nota. Minimizati perioada de timp in care suportul este
mentinut inafara baii de apa pentru a evita racirea tuburilor.
8. Incubati suportul la 42°C ± 1°C timp de 60 ± 5 minute.
J. Post-Amplificarea
Pipeta multicanal utilizata in procesul de hibridizare si selectie
trebuie alocata numai acestor pasi (a se vedea sectiunea
Atentionari si Masuri de Precautie). Temperatura ambientala in
timpul operatiunii de post-amplificare, incluzand procesul de
detectie, trebuie sa fie de 15°C pana la 30°C. Daca utilizati Baia
de Incalzire Uscata/Vortexer SB100 Dry, consultati fisa de
utilizare a SB100.
1. Hibridizarea
a. Scoateti suportul din baia de apa de pre-amplificare si
transferati-l in zona de post-amplificare. Adaugati 100
µL din Reactivul Probei reconstituite specific analitului,
utilizand o pipeta multicanal. Toate amestecurile de
reactie trebuie sa fi acum de culoare galbena.
b. Acoperiti tuburile cu cartele de sigilare si agitati cu
ajutorul agitatorului multi-tub vortex timp de 10 secunde,
sau pana cand culoarea este uniforma.
c. Incubati suportul intr-o baie de apa la 62°C ± 1°C timp
de 20 ± 5 minute.
d. Scoateti suportul din baia de apa si incubati la
temperatura camerei timp de 5 ± 1 minute.
2. Selectia
a. Utilizand pipeta multicanal, adaugati 250 µL de Reactiv
de Selectie in fiecare tub. Toate reactiile ar trebui sa fie
acum de culoare roz.
b. Acoperiti tuburile cu cartele de sigilare, agitati cu
ajutorul vortex-ului timp de 10 secunde, sau pana cand
culoarea este uniforma, si incubati suportul intr-o baie
de apa la 62°C ± 1°C timp de 10 ± 1 minute.
c. Scoateti suportul din baia de apa. Incubati suportul la
temperatura camerei timp de 15 ± 3 minute.
K. Detectia
Pentru utilizarea Luminometrului Leader HC+ consultati Manualul
de Operare al Luminometrului Leader HC+. Pentru utilizarea
Programului Analizei Progensa PCA3, consultati Quick Reference
Guide (Ghidul Rapid de Referinta) sau Manualul Operatorului si
Manualul Administratorului de Sistem al Programului Analizei
Progensa PCA3.
1. Pregatiti Luminometrul Leader HC+ prin asezarea unui TTU
gol in pozitia numarul 1 a casetei si o data efectuati
protocolul de SPALARE.
2. Asigurati-va ca exista cantitati suficiente de reactivi Auto
Detect 1 si 2 pentru a finaliza reactiile.
3. Incarcati TTU-urile in luminometru utilizand drept ghid
schema din luminometru. Daca testati ambii analiti (rulare
back-to-back), incarcati intai toate TTU-urile PCA3, urmate
imediat de toate TTU-urile PSA.
4. Logati-va la computer. Dati clic pe NEW RUN (CICLU NOU
DE RULARE) si selectati protocolul si co ncentratiile aferente
analizei. Selectati NEXT (CONTINUATI) pentru a incepe
ciclul de rulare.
Nota. Ciclul de rulare trebuie finalizat in decurs de 2 ore de
la terminarea etapei de selectie prin incubare la 62°C.
5. Pregatiti Lichidul de Dezactivare prin amestecarea unor
volume egale de solutie de hipoclorit de sodiu de 5% pana la
7% (0,7 M pana la 1,0 M) si Tampon pentru Lichid de
Dezactivare intr-un recipient din plastic cu capac cu
diametrul mare. Aplicati o eticheta si scrieti data de expirare
pe recipientul din plastic. Aceasta solutie tamponata de
dezactivare cu hipoclorit de sodiu este stabila timp de 4
saptamani la temperatura camerei.
6. Cand ciclul de rulare a luat sfarsit, soft-ul analizei va genera
doua rapoarte ale ciclurilor de rulare, un Raport Brut al
Rularii si un Raport al Proportiilor, daca ciclurile de rulare
sunt back-to-back (a se vedea sectiunile Proceduri de
Control de Calitate si Interpretarea Rezultatelor).
7. Cand ciclul de rulare a luat sfarsit, scoateti TTU-urile utilizate
din luminometru si asezati TTU-urile in recipientul cu Lichid
de Dezactivare. Lasati TTU-urile in recipient timp de cel
putin 15 minute inainte de a le arunca. Metodele
corespunzatoare de manipulare si indepartare (aruncare)
trebuie stabilite de catre directorul laboratorului.
Note Procedurale
Progensa PCA3
Progensa PCA3 Assay 10 501377RO Rev. 003
Note Procedurale
A. Pregatirea Specimenelor
1. Daca specimenele contin precipitate suspendate, incalziti la
37°C timp de pana la 5 minute dupa care intoarceti usor
tubul specimenului. In cazul in care precipitatul nu se
reconstituie solutie, asigurati-va de faptul ca precipitatul nu
impiedica distributia specimenului.
2. Specimenele congelate trebuie dezghetate la temperatura
camerei (15°C pana la 30°C, se poate utiliza o baie de apa)
intorcand ocazio nal fiolele in timpul procesului de
dezghetare pentru a impiedica formarea unui filtru insolubil.
Omogenizati fiolele prin usoara intoarcere de indata de
gheata din interiorul fiolei s-a topit destul incat sa se
desprinda si sa se miste libera. Continuati incalzirea pana
cand specimenul este complet dezghetat si omogenizati din
nou co ntinutul fiolelor prin intoarcerea usoara a acestora.
a. Daca se formeaza un dop, iar specimenele vor fi
pipetate cu ajutorul instrumentului TECAN Freedom
EVO 100/4, congelati specimenul, repetati instructiunile
de dezghetare si asigurati-va ca nici un dop nu se va
forma. Daca nu puteti elimina dopul, specimenul trebuie
pipetat manual.
b. Daca se formeaza un dop, iar specimenele vor fi
pipetate manual cu micropipeta, nu sunt necesare alte
operatiuni, dar asigurati-va ca dopul nu va impiedica
extragerea specimenului.
B. Pipetarea Controlului, a Calibratorului, si a Specimenului
1. Volumele de calibrator, control, sau specimen adaugate in
TTU trebuie sa fie de 400 µL. Pentru a asigura transferul
unui unei cantitati adecvate, se recomanda verificarea
vizuala a volumului pipetat in TTU. Pentru obtinerea unor
rezultate corecte, este necesar un volum corespunzator.
2. Asigurati-va de faptul ca varful este atasat pipetei in mod
corect si verificati astfel incat volumului setat sa fie corect.
Se recomanda verificarea vizuala a setarii volumului la
finalul fiecarui TTU (a fiecare 10 tuburi). Atunci cand
extrageti proba, eliberati pisto nul pipetei incet si cu viteza
constanta, pentru a evita producerea spumei sau a bulelor
de aer.
C. Reactivii
1. Solutia de Reconstituire a Probei poate forma precipitat in
timpul depozitarii. Incalziti solutia la 62°C ± 1°C timp de 1
pana la 2 minute. Dupa aceasta etapa de incalzire, Solutia
de Reco nstituire a Probei poate fi utilizata chiar daca inca
mai exista precipitat rezidual. Dupa resuspendare,
omogenizati fiola prin intoarcere usoara.
2. Cand pipetati alti reactivi decat cel al Enzimei, atingeti usor
peretele lateral al partii inferioare a tubului de reactie (unde
partea inferioara se curbeaza pentru a intalni peretii tubului).
Cand pipetati Reactivul Enzimei, atingeti direct partea din
centru a tubului de reactie. Confirmati vizual faptul ca
reactivii sunt dispensati in mod corect (fara cantitati de
reactiv in exces pe lateralele tuburilor si schimbarea
corespunzatoare a culorii).
D. Temperatura
1. Etapele de captare a tintei, de amplificare, de hibridizare, si
de selectie sunt dependente de temperatura. Astfel, este
obligatoriu ca baile de apa sa fie mentinute in limitele de
temperatura specificate.
2. Temperatura camerei este definita ca fiind de 15°C pana la
30°C.
E. Timpul
Reactiile de captare a tintei, de amplificare, de hibridizare, si de
selectie sunt toate dependente de timp. Respectati timpii specifici
mentionati in sectiunea Procedura de Testare.
F. Agitarea (cu ajutorul Vortex-ului)
Agitarea corespunzatoare este importanta pentru efectuarea cu
succes a Analizei Progensa PCA3. Pentru a agita tuburile de
reactie, setati pe minim viteza agitatorului votex de tip multi-tub,
fixati bine suportul, si porniti echipamentul. Mariti usor viteza pana
cand lichidul urca pana la jumatatea tubului. Agitati cu ajutorul
vortex-ului timp de 10 secunde, co nform timpului indicat, sau
pana cand culoarea este uniforma. Reglati viteza pe treapta cea
mai joasa inainte de a opri agitatorul vortex multi-tub si inainte de
a inlatura suportul. Amestecurile de reactie nu ar trebui sa atinga
niciodata cartelele de sigilare.
G. Baile de Apa
1. Nivelul apei din baile de apa trebuie mentinut la 3,8 pana la
5,0 cm (1,5 pana 2,0 in.) in adancime, masurat de la tavita
de sprijin de metal (de pe partea inferioara a baii de apa)
pana la suprafata apei. Aceasta co nditie va asigura
transferul corespunzator de caldura.
2. Pentru a evita contaminarea incrucisata, baile de apa trebuie
alocate unor etape specifice ale analizei.
H. Decontaminarea
1. Suprafetele si pipetoarele
Suprafetele de lucru din laborator si pipetoarele trebuie
decontaminate in mod regulat cu solutie de hipoclorit de
sodiu de 2,5% pana la 3,5% (0,35 M pana la 0,5 M). Lasati
solutia de hipoclorit de sodiu sa intre in contact cu
suprafetele timp de cel putin 1 minut, apoi clatiti cu apa. Nu
lasati solutia de hipoclorit de sodiu sa se usuce. Solutiile
ce contin clor pot produse pete de rugina pe echipament si
metal. Clatiti bine cu apa echipamentul, pentru a evita petele
de rugina.
2. Tuburile de Aspirare ale TCS
Dupa fiecare utilizare:
a. Dati la o parte tuburile de distributie.
b. Asezati un nou TTC in suportul pentru TTC. Porniti
pompa vacuum. Atasati tubulatura de aspirare de
varfurile din TTC. Aspirati toata Solutia de Spalare
ramasa in canalul de alimentare al statiei de distributie.
c. Turnati in canalul de alimentare cel putin 100 mL de
solutie hipoclorit de sodiu de 0,5% pana la 0,7% (0,07
M pana la 0,1 M), sau daca preferati de 2,5% pana la
3,5% (0,35 M pana la 0,5 M). Aspirati toata solutia prin
tuburile de aspirare.
d. Turnati cel putin 100 mL de apa deionizata in canalul
de alimentare. Aspirati toata apa prin tuburile de
aspirare.
Progensa PCA3
Proceduri de Control de Calitate
Progensa PCA3 Assay 11 501377RO Rev. 003
e. Expulzati varfurile in TTC-ul lor initial.
f. Lasati pompa vacuum pornita pana ce tuburile raman
uscate pentru a preveni fluxul invers (timp de
aproximativ 3 minute).
g. Decontaminati suprafetele sistemului de aspirare
conform celor descrise in sectiunea TCS Unit.
3. Recipinetul pentru reziduuri al TCS
Curatati recipientul pentru rezuduuri cel putin o data pe
saptamana sau atunci cand recipientul pentru rezuduuri este
25% plin, oricare dintre aceste situatii ar interveni prima.
a. Opriti pompa vacuum si lasati presiunea vacuum sa se
egalizeze.
b. Desfaceti racordurile de deconectare rapida dintre
recipientul pentru reziduuri si recipientul pentru prea-
plin, si recipientul pentru reziduuri si tuburile de aspirare.
c. Inlaturati recipientul pentru reziduuri din locasul
rezervorului de vid.
d. Inlaturati capacul si adaugati 400 mL de solutie
hipoclorit de sodiu de 5% pana la 7% (0,7M pana la
1,0M) in recipientul pentru reziduuri de 4 L.
Nota. Aceasta operatiune poate fi efectuata in dreptul
unei hote pentru a evita eliberarea de aburi in laborator.
e. Puneti capacul recipientului pentru reziduuri si rotiti
usor continutul pana la omogenizarea completa.
f. Lasati recipientul pentru reziduuri cu solutia cu clor timp
de cel putin 15 minute si apoi aruncati co ntinutul
(reziduurile).
g. Clatiti recipientul pentru reziduuri cu apa pentru a
indeparta reziduurile ramase in interiorul acestuia.
h. Puneti capacul recipientului pentru reziduuri gol si
asezati-l in locasul rezervorului de vid. Reatasati
racordurile de deconectare rapida la unitatea TCS.
Inlaturati cu atentie ambele manusi.
4. Unitatea TCS
Stergeti suprafetele unitatii TCS, sistemul de tuburi de
aspirare, si Spalati cu solutia Buffer suprafata dispozitivelor
de ejectare a varfurilor cu prosoape de hartie umezite in
solutie de hipoclorit de sodiu de 2,5% pana la 3,5% (0,35 M
pana la 0,5 M). Etapa de folosire a solutiei de hipoclorit de
sodiu trebuie urmata de etapa de clatire cu apa, apoi de cea
de uscare completa a suprafetelor cu prosoape de hartie.
5. Suporturile
Scufundati suporturile in solutie de hipoclorit de sodiu de
2,5% pana la 3,5% (0,35 M pana la 0,5 M), asigurandu-va ca
suporturile sunt acoperite de solutie. Mentineti suporturile
scufundate timp de 10 minute. Expunerea mai indelungata
va deteriora suporturile. Clatiti suporturile temeinic cu apa,
apoi uscati-le cu prosoape de hartie.
I. Contaminarea testelor
1. Introducerea materialelor contaminante poate avea loc
in cazul in care procedura de testare nu este respectata
cu rigurozitate.
2. TTU-urile trebuie decontaminate in Lichid de
Dezactivare conform indicatiilor din sectiunea
Procedura de Testare. Nu refolositi TTU-urile.
3. Efectuati in mod regulat operatiunea de decontaminare
a echipamentelor si a suprafetelor de lucru conform
indicatiilor de mai sus din sectiunea Decontaminarea.
4. Ca i n orice sistem de reactivi, pudra in exces de pe
unele tipuri de manusi poate duce la contaminarea
tuburilor neacoperite. Se recomanda ca operatorii sa
utilizeze manusi fara pudra.
Interpretarea Rezultatelor
Progensa PCA3
Progensa PCA3 Assay 12 501377RO Rev. 003
Proceduri de Control de Calitate
A. Valabilitatea Ciclurilor de Rulare
1. Calibratorii si controalele trebuie rulate cu toate testele pe acelasi suport cu specimenele de testare. Trebuie respectate urmatoarele criterii
pentru ca un ciclu de rulare sa fie considerat valabil:
Valoarea medie a RLU ale Calibratorului 2 > RLU ale Cutoff-ului
Unde RLU ale Cutoff-ului = RLU medie a Calibratorului 1
+ 1,645 deviatiile standard ale replicatelor RLU ale Calibratorului 1
+ 1,645 deviatiile standard ale replicatelor RLU ale Calibratorului 2.
Reproductibilitatea mediei de interpretare a Calibratorului 5 = 100 ± 30%
Reproductibilitatea mediei de interpretare a Controlului A = 100 ± 60%
Reproductibilitatea mediei de interpretare a Controlului B = 100 ± 35%
2. Soft-ul PCA3 evalueaza in mod automat rezultatele in comparatie cu criteriile indicate de mai sus si va raporta Statusul Ciclului de Rulare
drept REUSIT (PASS) daca sunt respectate criteriile de valabilitate, sau va raporta Statusul Ciclului de Rulare drept NEREUSIT (FAIL) in
cazul in care criteriile de valabilitate nu sunt respectate.
3. Daca Statusul unui Ciclu de Rulare este indicat ca fiind NEREUSIT, toate rezultatele testelor din acelasi ciclu de rulare sunt invalide pentru
acel analit si nu trebuie transmise.
4. Daca un ciclul de rulare este invalid, ciclul de rulare trebuie repetat pentru acel analit (a se vedea sectiunea Interpretarea Rezultatelor). Daca
un ciclul de rulare este valid pentru celalalt analit, acele rezultate pot fi folosite in analiza datelor impreuna cu rezultatele obtinute dupa
repetarea si validarea ciclului de rulare ale primului analit.
B. Valabilitatea Specimenului
In cadrul unui ciclu de rulare valid, rezultatele individuale ale specimenelor pot fi considerate drept INVALIDE si acest lucru va fi indicat in Raportul
Brut al Ciclurilor de Rulare (a se vedea sectiunea Interpretarea Rezultatelor). Cu toate ca replicatele individuale pentru un specimen pot fi valide,
un specimen va fi invalidat daca diferenta interpolata c/mL dintre replicate depaseste 600%. Testarea specimenului pentru acel analit trebuie
repetata.
Interpretarea Rezultatelor
A. Tipuri de Rapoarte
1. Raportul Brut al Ciclului de Rulare
Raportul Brut al Ciclului de Rulare furnizeaza informatii cu privire la validitatea ciclului de rulare (PASS sau FAIL; a se vedea sectiunea
Proceduri de Control de Calitate) si cu privire la tuburile individuale de reactie testate in cadrul Analizei Progensa PCA3. Daca un ciclu de
rulare este invalid (FAIL), toate tuburile din acel ciclu de rulare vor fi marcate ca fiind invalide. Totusi, tuburile individuale pot fi considerate
invalide in cadrul unui ciclu de rulare valid (PASS). In cazul ciclurilor de rulare back-to-back (adica ambii analiti PCA3 si PSA sunt testati in
acelasi ciclu de rulare al analizei), ciclul de rulare al unuia dintre analiti poate fi invalid, in timp ce ciclul de rulare al celuilalt analit este valid.
Rezumatul Exceptiilor se regaseste la finalul Raportului Brut al Ciclului de Rulare. In cazul ciclurilor de rulare back-to-back in care ambele
cicluri de rulare ale analitilor sunt valide, specimenele inregistrate in Rezumatul Exceptiilor pot necesita retestarea unuia dintre analiti. Desi un
rezultat al Scorului PCA3 poate fi inregistrat in Rezumatul Exceptiilor, acest rezultat nu este considerat raportabil pana cand nu se efectueaza
interpretarea manuala si pana cand rezultatul nu este inregistrat in Raportul Proportiilor. Daca numai unul dintre analiti a fost testat sau daca
ciclul de rulare al unuia dintre analiti este invalid, toate specimenele testate vor fi inregistrate in Rezumatul Exceptiilor.
2. Raportul Proportiilor
Softul analizei genereaza in mod automat un Raport al Proportiilor pentru ciclurile de rulare back-to-back in care ambele cicluri de rulare ale
analitilor sunt valide. Soft-ul calculeaza si indica Scorul PCA3 al specimenelor in Raportul Proportiilor. Specimenele indicate in Raportul
Proportiilor fie nu mai necesita testarea suplimentara, fie ambii analiti trebuie retestati. Specimenele neinregistrate in Raportul Proportiilor se
vor regasi in sectiunea Rezumatul Exceptiilor a Raportului Brut al Ciclului de Rulare.
Un Raport al Proportiilor poate fi de asemenea generat dupa interpretarea manuala (pentru mai multe informatii, consultati Interpretarea
Manuala).
3. Raportul QC (al Controlului de Calitate)
Raportul QC indica criteriile de validitate ale ciclului de rulare, concentratiile atribuite si interpretate, si reproductibilitatea calibratorilor si
controalelor. Raportul indica de asemenea parametrii care definesc curba de calibrare rezultata din determinarea celor patru parametrii
standard (3). Pentru mai multe informatii, consultati Manualul Operatorului Soft-ului pentru Analiza Progensa PCA3.
Progensa PCA3
Interpretarea Rezultatelor
Progensa PCA3 Assay 13 501377RO Rev. 003
B. Interpretarea
1. Interpretarea Automata
In cazul ciclurilor de rulare back-to-back in care ambele cicluri de rulare ale analitilor sunt valide, soft-ul interpreteaza in mod automat
rezultatele individuale ale analitilor PCA3 si PSA pentru specimene si determina Scorul PCA3 (daca acesta poate fi calculat). Rezultatele sunt
indicate in Raportul Proportiilor sau in Rezumatul Exceptiilor al Raportului Brut al Ciclului de Rulare.
2. Interpretarea Manuala
Cand analitii PCA3 si PSA sunt testati in cicluri de rulare diferite, soft-ul nu poate determina in mod automat Scorul PCA3. Este necesara
interpretarea manuala a rezultatelor analitilor pentru a determina Scorul PCA3 sau intervalul Scorului PCA3 (consultati Ghidul Rapid de
Referinta (Quick Reference Guide) sau Manualul Operatorului Soft-ului pentru Analiza Progensa PCA3). Interpretarea manual poate fi de
asemenea necesara pentru rezultatele inregistrate in Rezumatul Exceptiilor al Raportului Brut de Rulare. Dupa interpretarea manuala,
Scorul(rile) PCA3 pentru specimenul(ele) interpretat va(vor) fi inregistrat(e) intr-un nou Raport al Proportiilor.
C. Interpretarea Rapoartelor
1. Scorul PCA3
Nota. Numai Scorurile PCA3 si intervalul Scorului PCA3 inregistrate in Raportul Proportiilor sunt raportabile. Rezultatele care apar in
Rezumatul Exceptiilor pot necesita testari suplimentare si nu sunt raportabile.
Scorul PCA3 este calculat ca fiind raportul dintre copiile ARN PCA3 si copiile ARN PSA, inmultit cu 1000. Scorurile PCA3 pot fi calculate
numai utilizand rezultate obtinute din cicluri de rulare si specimene valide. Ciclurile de rulare invalide si specimenele invalide trebuie retestate
pentru analitul respectiv (pentru mai multe informatii, consultati sectiunea Retestarea).
Daca Scorul PCA3 raportat este sub valoarea cutoff-ului, rezultatul ar trebui interpretat ca fiind NEGATIV. Daca Scorul PCA3 este situat
deasupra sau este egal cu valoarea cutoff-ului, rezultatul ar trebui interpretat ca fiind POZITIV. Directorul laboratorului va stabili valoarea
cutoff (pentru mai multe informatii, consultati sectiunea Caracteristici de Performanta).
In anumite conditii, este furnizat intervalul Scorului PCA3 (>[Scorul PCA3 Calculat] sau <[Scorul Calculat]). Daca <[Scorul PCA3 Calculat] se
situeaza sub cutoff, rezultatul ar trebui interpretat ca fiind NEGATIV. Daca >[Scorul PCA3 Calculat] este situat deasupra cutoff-ului, rezultatul
ar trebui interpretat ca fiind POZITIV. Daca este necesara o valoare numerica, diluarea si retestarea specimenului pot genera un Scor PCA3
in loc de un interval al Scorului PCA3 (a se vedea Retestarea – Dilutia Specimenelor care se inscriu In Afara Intervalului Superior).
2. Interpretarea Codurilor Statusurilor si al Analizelor
Coloana Statusului, atat din Raportul Brut al Ciclului de Rulare cat si din Raportul Proportiilor indica informatiile in format "s:a". Codurile
specifice ciclurilor de rulare ("s") sunt indicate inaintea (in partea stanga a) coloanei si codurile analizei analit-specifice ("a") sunt indicate dupa
(in partea dreapta a) coloana. Codurile analit-specifice sunt indicate cu majuscule pentru rezultatele PCA3 si cu litere mici pentru rezultatele
PSA. Fiecare raport contine descrierile codurilor statusurilor si al analizelor care apar in acel raport. De exemplu, codurile pot indica daca un
specimen sau un replicat este valid sau daca se situeaza in afara intervalului. Consultati Ghidul Rapid de Referinta (Quick Reference Guide)
sau Manualul Operatorului Soft-ului pentru Analiza Progensa PCA3 pentru a obtine lista completa a codurilor statusurilor si al analizelor si alte
detalii.
Daca un Scor PCA3 este raportat in Raportul Proportiilor si daca pe coloanele Statusului PCA3 sau PSA nu apare nici un cod al statusului sau
al analizei, acest lucru inseamna ca ambii analiti testati au avut rezultate valide sau "in interval." Rezultatul specimenului poate fi transmis si
nu mai sunt necesare alte operatiuni.
In cazul in care codul statusului sau al analizei apare in Rezumatul Exceptiilor sau in Raportul Proportiilor, retestarea poate fi necesara (a se
vedea Interpretarea Rezultatelor din Rezumatul Exceptiilor si Interpretarea Rezultatelor din Raportul Proportiilor). Daca rezultatele analitilor
provin din cicluri de rulare diferite si au un cod (sau coduri) de analiza, combinatia pentru ambii analiti, in vederea determinarii daca alte
operatiuni suplimentare sunt sau nu necesare, se regaseste in Tabelul 4a sau Tabelul 4b.
Nota. Presenta unui cod de status sau de analiza nu implica in mod automat necesitatea unei retestari.
3. Interpretarea Rezultatelor din Rezumatul Exceptiilor
Este posibil ca Rezumatul Exceptiilor sa nu redea nici o exceptie. In aceste cazuri, nu sunt necesare alte operatiuni suplimentare.
Daca Rezumatul Exceptiilor indica un(niste) specimen(e) pentru ciclurile de rulare back-to-back in care ambele cicluri de rulare ale analitilor
sunt valide, consultati Tabelul 4 pentru mai multe instructiuni.
Pentru cucluri de rulare individuale, consultati sectiunea Interpretarea Codurilor Statusurilor si al Analizelor. In cazul ciclurilor de rulare back-
to-back in care un ciclu de rulare al analitului este invalid, retestati ciclul de rulare invalid (pentru mai multe informatii, a se vedea sectiunea
Retestarea), si luati in co nsiderare rezultatele ca si cum ciclurile de rulare individuale ale analitului au fost efectuate. Va fi necesara
interpretarea manuala.
Un specimen poate fi etichetat drept invalid desi tuburile individuale (replicatele) pot fi etichetate drept valide. Rezultatul combinat al al
replicatelor este acela care determina validitatea specimenului, si o diferenta mare intre replicate va invalida un specimen (pentru mai multe
informatii, consultati sectiunea Proceduri de Control de Calitate).
Interpretarea Rezultatelor
Progensa PCA3
Progensa PCA3 Assay 14 501377RO Rev. 003
Tabelul 4: Conditiile Rezumatului Exceptiilor Analizei Progensa PCA3
Rezultatul PCA3
(Codul Analizei *)
Rezultatul PSA
(Codul Analizei *)
Scorul PCA3
Inregistrat
Testare
Suplimentara?
Operatiune/
Comentariu
Se inscrie in interval
(nici un cod)
Invalid**
(A, B, E, H, sau I)
-- Da
Retestati PSA (vezi
Retestarea) si interpretati manual rezultatele.
In afara intervalului
inferior
(g)
Invalid
(A, B, E, H, sau I) -- Da
Retestati PSA
(vezi Retestarea) si interpretati manual rezultatele.
Invalid
(a, b, e, h, s au i)
Se inscrie in interval
(nici un cod)
-- Da
Retest PCA3 (vezi Retestarea) and interpretati manual
rezultatele.
Se inscrie in interval
(nici un cod)
In afara intervalului
superior
(F)
<[Scorul PCA3
Calculat]*** Optional
1. Interpretati manual pentru a obtine <[Scorul PCA3 Calculat]
SAU
2. Diluati specimenul in diluantul pentru specimen (vezi
Dilutia
Specimenelor care se inscriu in afara intervalului superior
),
retestati PSA, si interpretati manual rezultatele daca este necesar
un Scor PCA3.
In afara intervalului
superior
(f)
Se inscrie in interval
(nici un cod)
>[Scorul PCA3
Calculat] Optional
1. Interpretati manual pentru a obtine >[Scorul Calculat] SAU
2. Diluati specimenul in diluantul pentru specimen, retestati
PCA3, si interpretati manual
rezultatele daca este necesar un
Scor PCA3.
In afara intervalului
inferior
(g)
Se inscrie in interval
(nici un cod)
<[Scorul PCA3
Calculat] Nu
Interpretati manual pentru a obtine <[Scorul
PCA3 Calculat].
In afara intervalului
inferior
(g)
In afara i ntervalului
superior
(F)
<[Scorul
PCA3Calculat] Nu
Interpretati manual pentru a obtine <[Scorul
PCA3 Calculat].
*Pentru lista completa a codurilor analizelor, consultati Manualul Operatorului softului Analizei Progensa PCA3.
**Se aplica numai in cazul specimenelor invalide din cadrul unui ciclu de rulare valid.
***Pentru valorile inscrise in afara intervalului, Scorul Calculat este obtinut utilizand nivelurile de copiere pentru cel mai apropiat calibrator pozitiv.
4. Interpretarea Rezultatelor din Raportul Proportii lor
Daca un specimen este regasit in Raportul Proportiilor cu un Scor PCA3, rezultatul este un Scor PCA3 reportabil si nu sunt necesare
operatiuni suplimentare. Daca nu este inregistrat nic un Scor PCA3, fapt exprimat prin semnul "--" in coloana Scorului PCA3, co nsultati
Tabelul 5 pentru instructiuni.
Tabelul 5: Conditiile Raportului Proportiilor al Analizei Progensa PCA3
Rezultatul PCA3
(Codul Analizei*)
Rezultatul PSA
(Codul Analizei*)
Scor PCA3
Inregistrat
Testare
Suplimentara?
Operatiune/
Comentariu
Se inscrie in interval
(nici un cod)
Se inscrie in interval
(nici un cod)
Scor PCA3 Nu
Nu sunt necesare operatiuni suplimentare; rezultatul poate fi
transmis.
Invalid**
(a, b, e, h, sau i)
Invalid
(A, B, E, H, sau I)
-- Da
Retestati ambii analiti (vesi
Retestarea).
Invalid
(a, b, e, h, sau i)
In afara intervalului
superior
(F)
-- Da
Diluati specimenul in diluantul pentru specimen (vezi Diluarea
Specimenelor inscrise In afara intervalului superior
), retestati
ambii analiti.
In afara intervalului
superior
(f)
Invalid
(A, B, E, H, sau I) -- Da
Diluati specimenul in diluantul pentru specimen, retestati ambii
analiti.
In afara intervalului
superior
(f)
In afara intervalului
superior
(F)
-- Da
Diluati specimenul in diluantul pentru specimen, retestati ambii
analiti.
Invalid
(a, b, e, h, or i)
In afara intervalului
inferior
(G)
-- Nu
Proba nu are suficient ARN pentru o analiza exacta. Un nou
specimen trebuie recoltat de la pacient.
Se inscrie in interval
(nici un cod)
In afara intervalului
inferior
(G)
-- Nu
Proba nu are suficient ARN pentru o analiza exacta. Un nou
specimen trebuie recoltat de la pacient.
In afara intervalului
superior
(f)
In afara intervalului
inferior
(G)
-- Nu
Proba nu are suficient ARN pentru o analiza exacta. Un nou
specimen trebuie r
ecoltat de la pacient.
In afara intervalului
inferior
(g)
In afara intervalului
inferior
(G)
-- Nu
Proba nu are suficient ARN pentru o analiza exacta. Un nou
specimen trebuie recoltat de la pacient.
Progensa PCA3
Caracteristici de Performanta
Progensa PCA3 Assay 15 501377RO Rev. 003
* Pentru lista completa a codurilor analizelor, consultati Manualul Operatorului softului Analizei Progensa PCA3
** Se aplica numai in cazul specimenelor invalide din cadrul unui ciclu de rulare valid. Daca specimenele au fost invalide din cauza faptului ca ciclul de
rulare a fost invalid, rezultatele vor fi inregistrate in Rezumatul Exceptiilor (pentru mai multe informatii, vezi Interpretarea Rezultatelor din Rezumatul
Exceptiilor).
D. Retestarea
1. Linii Directoare pentru Retestare
a. Desi nu este abso lut necesar ca ambii analiti sa fie testati in cadrul aceluiasi ciclu de rulare, ambele rezultate ale analitilor trebuie sa
provina din aceeasi fiola de a probei pentru a obtine un Scor PCA3 raportabil.
b. Toate ciclurile de rulare invalide trebuie repetate si toate specimenele invalide din cicluri de rulare valide trebuie retestate.
c. Retestati specimenul(ele) utilizand un nou set de calibratori si controale.
d. Este esentiala depozitarea corespunzatoare a resturilor de specimen inainte de Retestare (pentru mai multe informatii, co nsultati
sectiunea Recoltarea, Transportul si Pastrarea Specimenelor).
e. Interpretarea manuala a analitilor PCA3 si PSA poate fi necesara pentru a determina Scorul PCA3 (pentru mai multe informatii, consultati
sectiunea Interpretarea Manuala).
2. Diluarea Specimenelor inscrise iIn afara intervalului superior
a. Daca valoarea concentratiei unui specimen este superioara valorii Calibratorului 5 in cadrul unui ciclu de rulare valid, rezultatul se inscrie
"in afara intervalului superior" si va fi marcat cu un cod de analiza "f" sau "F" in raportul(le) ciclului de rulare. Valoarea co ncentratiei va fi
indicata drept >[Valoarea concentratiei Calibratorului 5].
b. Intoarceti tubul specimenului de urina procesata pentru a omogeniza specimenul inainte de diluarea acestuia. Dilutia recomandata, dar
nu neaparat necesara, este de 1:10 utilizand Kitul Progensa PCA3 pentru Diluarea Specimenelor. Intr-o fiola corespunzatoare, adaugati
1800 µL de diluant pentru specimenele si 200 µL de specimen; puneti capacul tubului si intoarceti de cinci ori pentru o omogenizare
completa. Factorul de dilutie va fi "10" in lista de lucru a ciclului de rulare. In cazul in care ambii analiti vor fi retestati, dublati volumele
(utilizati 3600 µL de diluant pentru specimen si 400 µL de specimen). Consultati insertul tehnic al Kitului Progensa PCA3 pentru Diluarea
Specimenelor. Testati specimenul diluat cu analiza.
c. In cazul in care, dupa retestare, rezultatul specimenului se situeaza tot in afara intervalului superior, este necesara o noua diluare oana
cand rezultatul specimenului se inscrie in intervalul calibratorilor. Diluarea ulterioara celei initiale de 1:10 este permisa, cu conditia ca
dilutia initiala de 1:10 sa fi fost pastrata in mod corespunzator (pentru mai multe informatii, consultati sectiunea Recoltarea, Transportul si
Pastrarea Specimenelor).
Limitari
A. Analiza Progensa PCA3 nu ar trebui utilizata in cazul pacientilor aflati in tratament medicamentos despre se stie ca influenteaza nivelurile de PSA
din ser, cum ar fi finasterida (Proscar, Propecia), dutasterida (Avodart), si terapia anti-androgen (Lupron). Influenta acestor medicatii asupra
expresiei genei PCA3 nu a fost inca evaluata.
B. Anumite proceduri terapeutice si de diagnosticare, cum ar fi prostatectomia, excizia, biopsia prostatei, si altele, pot afecta caracterul viabil al
tesutului prostatei si ulterior influenteaza Scorul PCA3. Efectul acestor proceduri asupra performantei analizei nu a fost evaluat inca. Probele de
testare a PCA3 ar trebui recoltate atunci cand un medicul clinician este de parere ca tesutul prostatei s-a refacut.
C. Aceasta analiza trebuie efectuata numai de catre personal care a fost instruit in vederea realizarii acestei proceduri. Nerespectarea i ns tructiuni lor
oferite in acest insert poate duce la obtinerea unor rezultate eronate.
D. Fiecare laborator trebuie sa valideze in mod independent un proces de transfer LIS.
E. Obtinerea unor rezultate corecte depinde de recoltarea adecvata a specimenelor de urina. Din cauza faptului ca sistemul de transport utilizat pentru
aceasta analiza nu permite evaluarea microscopica a caracterului adecvat al specimenului de urina, este necesara instruirea personalului clinic cu
privire la tehnicile corespunzatoare de recoltare a specimenelor de urina. Pentru instructiuni, consultati sectiunea Recoltarea, Transportul si
Pastrarea Specimenelor. Pentru informatii detaliate, consultati insertul tehnic furnizat in Kitul Progensa PCA3 de Transport al Specimenelor de
Uri na.
F. Rezultatele Analizei Progensa PCA3 ar trebui interpretate in corelatie cu alte date clinice si de laborator furnizate medicului clinician. (Rezultatele
testelor pot fi influentate de recoltarea recoltarea necorespunzatoare a specimenelor, de erori tehnice, sau de incurcarea specimenelor.)
Caracteristici de Performanta
Progensa PCA3
Progensa PCA3 Assay 16 501377RO Rev. 003
Caracteristici de Performanta
A. Rezultate Clinice
1. Sensibilitatea si Specificitatea Diagnosticului
Caracteristicile de performanta ale Analizei Progensa PCA3 au fost stabilite utilizand specimene recoltate de la pacienti inscrisi la patru clinici
din locatii diferite din punct de vedere geografic din America de Nord. Populatia pacientilor a fost formata din 529 de barbati programati pentru
efectuarea biopsiei prostatei. Demografica pacientilor este indicata mai jos:
a. Varsta Medie ± SD = 64 ± 8 ani (media de 63, interval intre 32 si 89)
b. Nivelul mediu de PSA in ser = 7,9 ± 21,9 µg/L (5,6, 0,3 pana la 484)
c. Volumul mediu al prostatei (determinat trans-rectal prin ultrasunete) = 44 ± 25 cc (39, 5 pana la 225)
d. 34% (180/529) cu un rezultat pozitiv al biopsiei pentru cancerul de prostata
Figura 3 indica corelatia Scorului PCA3 cu probabilitatea biopsiei pozitive. Pe masura ce Scorul PCA3 a crescut, frecventa biopsiei cancer-
pozitive in randul pacientilor s-a marit.
Figura 3. Corelatia Scorului PCA3 cu Probabilitatea Biopsiei Pozitive
A fost efectuate studii privind caracteristicile de f unctionare a receptorului (ROC), utilizand drept metoda de referinta biopsia prostatei, conform
CLSI GP10-A (1995) (4). In cazul Analizei Progensa PCA3, zona sub curba (AUC) a fost de 0,685 (interval de incredere de 95% = 0,637 pana
la 0,733). Tabelul 6 indica sensibilitatea si specificitatea diagnosticului pentru valori diferite ale cutoff-ului Scorului PCA3. Fiecare laborator ar
trebui sa isi stabileasca valoarea cutoff-ului pentru sensibilitatea sau specificitatea diagnosticului (a se vedea sectiunea Interpretarea
Rezultatelor).
Tabelul 6: Sensibilitatea si Specificitatea Diagnosticului Analizei Progensa PCA3 pentru Valori Diferite ale Cutoff-ului Scorului PCA3
Val. Cutoff-ului Scorului PCA3
5
10
15
25
35
50
95
Sensibilitate
96%
85%
77%
63%
53%
41%
17%
Specificitate
14%
33%
47%
61%
74%
84%
95%
2. Studii de Stabilitate a Specimenelor
a. Stabilitatea in cazul specimenelor de urina integrala: Prima urina a fost recoltata de la 10 pacienti si pastrata la 2°C pana la 8°C sau la
30°C inainte de procesare prin adaugarea mediului de transport al urinei (UTM). La temperaturile de 2°C pana la 8°C, in cazul unora
dintre spcimene, dupa patru ore, s-a observat o degradare semnificativa a mARN PCA3 si PSA. Asadar, urina integrala trebuie
procesata in decurs de 4 ore. La 30°C, o degradare semnificativa a fost observata in mai putin de 1 ora. Asadar, urina integrala trebuie
intotdeauna pastrata la temperaturi scazute sau la gheata inainte de a fi procesata.
b. Stabilitatea in cazul specimenelor de urina procesata: Douasprezece specimene au fost incubate la 4°C sau 30°C timp de pana la 38 de
zile. La 4°C, ARN PCA3 si PSA au fost stabili timp de 21 de zile; la 30°C, au fost dtabili timp de 5 zile. Specimenele pastrate la -20°C si -
70°C au dovedit o stabilitate a ARN PCA3 si PSA de pana la 90 de zile.
c. Stabilitatea in cazul ciclurilor de congelare-dezghetare: Specimenele au fost supuse de 6 ori unor cicluri de congelare-dezghetare la
temperaturi intre 37°C si -70°C. Nu s-a observat nici o scadere a nivelurilor copiilor ARN PCA3 sau PSA.
Progensa PCA3
Caracteristici de Performanta
Progensa PCA3 Assay 17 501377RO Rev. 003
B. Rezultate Analitice
1. Sensibilitatea Analitica
Un panel pentru analiza sensibilitatii compus din transcript ARN in vitro, diluat, a fost utilizat pentru a evalua sensibilitatea analizei. Un
operator a testat panelul in cadrul a douasprezece cicluri de rulare a cinci replicate, utilizand un singur lot de reactivi. Limita de detectie si
limita de cuantificare au fost calculate conform CLSI EP17-A (2004) (5). Limita de detectie a analitului PCA3 a fost de 80 c/mL, iar pentru
analitul PSA limita de detectie a fost de 1.438 c/mL. Limita de cuantificare ai ambilor analiti a fost Calibratorul 2.
2. Specificitatea Analitica
a. Transcriptul necuplat: Analiza Progensa PCA3 a fost conceputa numai pentru detectia ARN PCA3 cuplat cu secventele exon 3-exon 4
specifice cancerului de prostata (2). Analiza nu a detectat 1 milion de c/mL de ARN PCA3 necuplat, semnificativ deasupra mediei.
b. Specificitatea ARN PCA3 al prostatei in urina: Specimenele recoltate de la pacienti dupa prostatectomia totala (n = 97) au fost testate cu
Analiza Progensa PCA3, iar nivelurile de ARN PCA3 au fost comparate cu cele recoltate de pa pacienti inainte de biopsie (n = 464).
Valoarea medie in c/mL a ARN PCA3 s-a situat sub limita de detectie a analizei in cazul specimenele recoltate post-prostatectomie, in
timp ce media in c/mL a ARN PCA3 in cazul specimenelor recoltate inainte de biopsie a fost de 7.243 c/mL; aceste date confirma faptul
ca ARN PCA3 in urina este determinat de prostata.
c. Specificitatea Tesutului: ARN-ul total a fost extras din tesutul a doi donatori barbati, unici din punct de vedere al tipului de tesut, adaugat
in diluant pentru specimen (10 ng per reactie), si testat cu Analiza Progensa PCA3. Tesutul prostatei a fost singurul tip de tesut detectat
peste limita de dectie a ARN PCA3 a tipurilor de tesut mentionate in Tabelul 7.
Tabelul 7: Tipurile de Tesut Barbatesc Testat pentru ARN PCA3
Tip de Tesut
Vezica urinara (Normal)
Rinichi
Vezica urinara (Tumor)
Penis
Maduva Osoasa
Prostata
Ductus deferens
Vezica Seminala
Epididymus
Testis (Testicol)
d. Substante ce interfereaza: Substantele enumerate in Tabelul 8 au fost adaugate in alicote de urina barbateasca procesata de tip pool.
Specimenele au fost testate cu Analiza Progensa PCA3 in conformitate cu CLSI EP7-A2 (2005) (6). In cazul concentratiilor mentionate,
nu s-a observat nici o influenta asupra analizei.
Tabelul 8: Substante Testate pentru Interferenta cu Analiza Progensa PCA3
Agenti Terapeutici
Agenti Terapeutici,
continuare
Agenti Terapeutici
Agenti Terapeutici,
continuare
Substanta
Concentratia Testului
Substanta
Concentratia Testului
Acetaminophen/Codeine
5,34 µmol/L
Uroxatral
30 mg/L
Atorvastatin
25 mg/L
Doxazosin
1,33 µmol/L
Lisinopril
0,74 µmol/L
Terazosin
7,8 µmol/L
Amlodipine
245 µmol/L
Finasteride
15 mg/L
Atenolol
37,6 µmol/L
Tamsulosin
1,2 µg/L
Sulfasalazine
754 µmol/L
Metformin
310 µmol/L
Esomeprazole
120 mg/L
Sildenafil
12,9 pmol/L
Allop uri no l
294 µmol/L
Saw palmetto
1600 mg/L
Diphenhydramine
19,6 µmol/L
Selenium
0,275 mg/L
Acetaminophen
1324 µmol/L
Acetylsalicylic acid
3,62 mmol/L
Constituenti ai Urinei
Ibuprofen
2425 µmol/L
Substanta
Concentratia Testului
Furosemide
181 µmol/L
Acid uric
1,4 mmol/L
Ciprofloxacin
30,2 µmol/L
Hemoglobina
2 g/L
Levaquin
48,6 µmol/L
Globule albe din sange
4,56 x 107 cells/L
Doxycycline
67,5 µmol/L
Celule rosii din sange
3,06 x 107 cells/L
Fluoxetine hydrochloride
11,2 µmol/L
Albumina
50 g/L
Flutamide
1500 mg/L
Bilirubina (neconjugata)
342 g/L
Dutasteride
1,5 mg/L
IgG
60 g/L
Caracteristici de Performanta
Progensa PCA3
Progensa PCA3 Assay 18 501377RO Rev. 003
3. Exactitate
Exactitatea Analizei Progensa PCA3 a fost evaluata in conformitate cu CLSI EP15-A2 (2005) (7). Transcriptele ARN PCA3 si PSA au fost
cuantificate prin spectrofotometrie UV-vis, apoi adaugate in urina normala, procesata, recoltata de la femei (nu s-au detectat ARN PCA3 sau
PSA), si concentratii masurate in Analiza Progensa PCA3. Procentul (%) de interpretare a fost calculat drept un raport dintre c/mL measurati
si c/mL adaugati, inmultit cu 100.
Tabelul 9: Reproductibilitatea copiei in Analiza Progensa PCA3
Analit
Concentratia Cunoscuta,
c/mL
Concentratia Masurata,
c/mL
% Reproductibilitate
PCA3
750
808
108%
7.500
7.618
102%
18.750
18.722
100%
75.000
70.287
94%
PSA
20.000
23.684
118%
250.000
278.373
111%
500.000
599.941
120%
1.750.000
1.960.775
112%
4. Linearitatea si Intervalul
Intervalul linear al Analizei Progensa PCA3 a fost determinat in conformitate cu CLSI EP6-A (2003) (8) pe baza analizei regresiei lineare
(metoda celor mai mici patrate). Doua seturi de serii de diluare au fost pregatite din specimene continand concentratii mari de ARN PCA3 si
PSA. Un set a fost diluat in urina procesata recoltata de la femei si un set a fost diluat in diluant pentru specimene. Dilutiile au parcurs intregul
interval al analizei intre valoarea cea mai scazuta si cea mai ridicata a calibratorilor pozitivi pentru fiecare. Pentru ambii analiti PCA3 si PSA,
rezultatele masurate prin analiza au indicat o relatie de direct proportionalitate intre dilutiile testate si c/mL de analit reportate. Nu a existat nici
un efect semnificativ al matricei diluantului. A se vedea Figura 4.
Figura 4. Linearitatea Analizei Progensa PCA3 pentru Analitii PCA3 si PSA
Analit PCA3 Analit PSA
y = 0.9932x + 613.87
R
2
= 0.9998
O = Specimen diluent
y = 0.9523x - 79.762
R
2
= 0.9999
∆ = Ur in e
0.0E+00
2.0E+04
4.0E+04
6.0E+04
8.0E+04
1.0E+05
1.2E+05
1.4E+05
0.0E+00 3.0E+04 6.0E+04 9.0E+04 1.2E+05
Expected c/m L PCA3
Measured c/mL PCA3
y = 1.0875x - 27939
R2 = 0.9991
O = Specimen diluent
y = 0.9663x + 27393
R2 = 0.9973
∆ = Ur in e
0.0E+00
5.0E+05
1.0E+06
1.5E+06
2.0E+06
2.5E+06
3.0E+06
0.0E+00 5.0E+05 1.0E+06 1.5E+06 2.0E+06 2.5E+06 3.0E+06
Expected c/m L PSA
Measured c/mL PSA
Progensa PCA3
Bibliografie
Progensa PCA3 Assay 19 501377RO Rev. 003
5. Precizia
Precizia Analizei Progensa PCA3 a fost evaluata in conformitate cu CLSI EP5-A2 (2004) (9). Repetabilitatea este precizia in conditii de
minima variabilitate, iar reproductibilitatea este precizia in conditii de maxima variabilitate.
Pentru repetabilitate, a fost pregatit un panel de testare alcatuit din trei componente, constand in transcript ARN in vitro, diluat. Un operator al
unei locatii a testat panelul in 20 de cicluri de rulare a 5 replicate in decurs de 20 de zile, utilizand un singur lot de calibrator si control, un lot
de reactivi, si un set de echipamente. Tabelul 10 indica precizia repetabilitatii Analizei Progensa PCA3 in cazul unor niveluri diferite de
concentratii de testare.
Tabelul 10: Repetabilitatea Analizei Progensa PCA3
Analit Component Panel
Media
c/mL
Repetabilotatea
SD
Repetabilitatea
CV
PCA3
1
1.228
145
12%
2
12.020
809
7%
3
61.108
2.489
4%
PSA
1
48.091
3.715
8%
2
484.457
41.026
8%
3
2.001.430
131.554
7%
Pentru reproductibilitate, a fost pregatit un panel de testare cu 8 componente ce a constat in specimene de tip pool (1 pana la 3) si transcript ARN in
vitro, diluat (4 pana la 8). Trei operatori au testat panelul in cadrul a 18 cicluri de rulare in decurs de 3 zile, utilizand un singur lat de calibrator si control,
3 loturi de reactivi, si 3 seturi de echipamente. Tabelele 11 si 12 rezuma precizia totala, i ntra-ciclu de rulare, si inter-ciclu de rulare, a operatorului, a
echipamentelor, si a lotului Analizei Progensa PCA3 pentru c/mL de analit si pentru Scorul PCA3.
Variabilitatile intra-ciclu de rulare, inter-operator, si inter-ciclu de rulare au contribuit cel mai mult, in ordine descrescatoare, la variabilitatea generala a
analizei. Lotul reactivilor si echipamentul au contribuit in mica masura la variabilitatea generala a analizei. Aceste rezultate demonstreaza faptul ca
Analizei Progensa PCA3 are un caracter de reproductibilitate, si ca principala sursa a variatiilor este aceea a erorilor aleatoare (intra-ciclu de rulare).
Tabelul 11: Reproductibilitatea Analizei Progensa PCA3: Analiza Copiilor/mL
Analit Component
Panel n c/mL
Masurat CV T otal
CV
Intra-Ciclu
de rulare
CV
Inter-Ciclu
de rulare
CV, Inter-
Operator
CV, Inter-
Echipament
CV, Inter-Lot
PCA3
1
36
248
27%
24%
7%
15%
11%
0%
2
36
7.021
11%
6%
9%
9%
0%
0%
3
36
31.469
8%
6%
5%
9%
0%
4%
4
36
1.469
15%
13%
7%
6%
0%
1%
5
36
14.844
7%
5%
2%
6%
0%
4%
6
36
72.372
7%
4%
6%
0%
1%
0%
7
36
430
26%
26%
0%
11%
0%
1%
8
36
62.274
13%
8%
8%
3%
0%
5%
PSA
1
34
52.739
9%
6%
6%
7%
4%
2%
2
34
218.789
10%
6%
7%
7%
4%
0%
3
32
1.073.920
11%
4%
6%
9%
8%
0%
4
34
37.185
9%
5%
7%
3%
0%
1%
5
32
386.504
10%
4%
8%
6%
3%
4%
6
34
1.518.748
12%
5%
8%
4%
3%
7%
7
32
11.007
14%
8%
9%
0%
6%
0%
8
34
1.694.404
11%
7%
7%
0%
1%
6%
Tabelul 12: Reproductibilitatea Analizei Progensa PCA3: Analiza Scorului PCA3
Component
Panel * n Scor Mediu
CV Total
CV Intra-
Ciclu de
rulare
CV Inter-
Ciclu de
rulare
CV, Inter-
Operator
CV, Inter-
Equipment
CV, Inter-
Lot
1
34
5
27%
26%
5%
23%
8%
0%
2
34
32
14%
9%
10%
12%
0%
2%
3
32
30
12%
7%
5%
17%
7%
6%
7
32
39
28%
24%
2%
8%
11%
7%
8
34
37
21%
14%
12%
0%
0%
9%
*Componentele 4 pana la 6 ale panelului au continut numai transcript al ARN PCA3 sau PSA si astfel nu au fost incluse in aceasta analiza.
Bibliografie
Progensa PCA3
Progensa PCA3 Assay 20 501377RO Rev. 003
Bibliografie
1. Bussemakers, M.J.G., A. Van Bokhoven, G.W. Verhaegh, F.P. Smit, H.F.M. Karthaus, J.A. Schalken, F.M.J. Debruyne, N. Ru, and W.B.
Isaacs. 1999. DD3: A New Prostate-Specific Gene, Highly Overexpressed in Prostate Cancer. Cancer Res. 59:5975-5979.
2. Hessels, D., J.Mt. Klein Gunnewiek, I. van Oort, H.F.M. Karthaus, G.J.L. van Leenders, B. van Balken, L.A. Kiemeney, J.A. Witjes, and
J.A. Schalken. 2003. DD3PC A3-based Molecular Urine Analysis for the Diagnosis of Prostate Cancer. European Urology. 44:8-16.
3. Groskopf J., S.M. Aubin, I.L. Deras, A. Blase, S. Bodrug, C. Clark, S. Brentano, J. Mathis, J. Pham, T. Meyer, M. Cass, P. Hodge, M.L.
Macairan, L.S. Marks, and H. Rittenhouse. 2006. Aptima PCA3 Molecular Urine Test: Development of a Method to Aid in the Diagnosis of
Prostate Cancer. Clin Chem. 52:1089-95.
4. CLSI. 1995. CLSI document GP10-A, Assessment of the Clinical Accuracy of Laboratory Tests Using Receiver Operating Characteristic
(ROC) Plots. CLSI, Wayne, PA.
5. CLSI. 2004. CLSI document EP17-A, Protocols for Determination of Limits of Detectio n and Limits of Quantitation. CLSI, Wayne, PA.
6. CLSI. 2005. CLSI document EP7-A2, Interference Testing in Clinical Chemistry. CLSI, Wayne, PA.
7. CLSI. 2005. CLSI document EP15-A2, User Verification of Performance for Precision and Trueness. CLSI, Wayne, PA.
8. CLSI. 2003. CLSI document EP6-A, Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical Approach. CLSI,
Wayne, PA.
9. CLSI. 2004. CLSI document EP5-A2, Evaluatio n of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods. CLSI, Wayne, PA.
Hologic, Inc.
10210 Genetic Center Drive
San Diego
, CA 92121 SUA
Serviciu de asistenţă clienţi: +1 800 442 9892
customersupport@hologic.com
Asistenţă tehnică: +1 888 484 4747
molecularsupport@hologic.com
Pentru date de contact suplimentare, vizitaţi www.hologic.com.
Hologic, Aptima, DTS, Leader, Progensa, şi SB100 sunt mărci comerciale şi/sau mărci comerciale înregistrate ale Hologic, Inc. şi/sau subsidiarelor
acesteia, în Statele Unite ale Americii şi/sau alte ţări.
eppendorf (stylized) si REPEATER sunt marci comerciale apartinand Eppendorf AG.
RAININ este marca comerciala a Rainin Instrument, LLC.
TECAN si FREEDOM EVO sunt marci comerciale ale Tecan Group AG.
Toate celelalte mărci comerciale care ar putea apărea în acest prospect sunt deţinute de respectivii proprietari.
Este posibil ca acest produs să fie acoperit de unul sau mai multe brevete S.U.A. identificate la adresa www.ho logic.com/patents.
©2006-2018 Hologic, Inc. Toate drepturile rezervate.
501377RO Rev. 003
2018-03
  • Page 1 1
  • Page 2 2
  • Page 3 3
  • Page 4 4
  • Page 5 5
  • Page 6 6
  • Page 7 7
  • Page 8 8
  • Page 9 9
  • Page 10 10
  • Page 11 11
  • Page 12 12
  • Page 13 13
  • Page 14 14
  • Page 15 15
  • Page 16 16
  • Page 17 17
  • Page 18 18
  • Page 19 19
  • Page 20 20

Hologic Progensa PCA3 Assay Instrucțiuni de utilizare

Marca
Hologic
Model
Progensa PCA3 Assay
Tip
Instrucțiuni de utilizare
Descărcați PDF
raport

Lucrări conexe

Alte documente